MicroRNA-430靶向調(diào)控CXCR7對膀胱癌細胞生物學行為的影響及其機制的研究.pdf

1、目的:
　　膀胱癌是人類常見的惡性腫瘤，然而其增殖和侵襲的分子機制依舊不明。
　　MicroRNAs（miRNAs）是一類微小的內(nèi)源性非編碼的RNA，通過與靶位點mRNA的3'端非翻譯區(qū)UTR相互作用來抑制基因的表達。新近的數(shù)據(jù)表明，miRNAs在各種生物過程，包括人類癌癥的發(fā)生發(fā)展侵襲轉移的調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用。mirna-430的研究主要是在斑馬魚上進行研究，miR-430已被證明與斑馬魚的早期胚胎發(fā)育有重要關系。然而

2、，mir-430在涉及人類惡性腫瘤的調(diào)控上暫時沒有報道。CXCR7是趨化因子SDF-1α即CXCL12的受體，其是一種具有7次跨膜的基質(zhì)蛋白。CXCR7的高表達被很多研究報道在腫瘤的發(fā)生發(fā)展侵襲轉移中有增強作用，建議CXCR7作為癌癥治療中一個有吸引力的目標。Yates等發(fā)現(xiàn)CXCR7的表達在膀胱癌組織中增高，并且其增高的水平伴隨著高級別的腫瘤及腫瘤轉移。此外，CXCR7已被證實通過多種途徑與膀胱癌的增殖、遷移、侵襲有關，其中包括ERK

3、，Stat3與AKT等信號通路。本研究目的為驗證miR-430靶向作用于CXCR7，并進一步闡述這種靶向作用對膀胱癌細胞的影響及對其作用機制進行初步的研究。
　　方法:
　　1、采用Real-time PCR檢測miR-430在正常膀胱組織、癌旁組織及不同分期的膀胱癌組織中的表達情況。采用雙熒光素酶報告系統(tǒng)驗證miR-430與CXCR7之間的靶向調(diào)控關系。
　　2、構建miR-430過表達慢病毒載體和CXCR7過表達真

4、核質(zhì)粒載體。
　　3、采用MTT法、流式細胞檢測法、TransWell法等常用方法對miR-430過表達慢病毒感染和CXCR7過表達質(zhì)粒轉染的人膀胱癌5637細胞進行實驗，從細胞生長、細胞周期、侵襲能力、克隆形成的方面來檢測miR-430靶向調(diào)控CXCR7對膀胱癌生物學行為的影響。
　　4、用Western-Blot方法來檢測轉染了miR-430過表達慢病毒和CXCR7過表達質(zhì)粒的膀胱癌5637細胞中ERK、p-ERK、MM

5、P-2、MMP-9的表達情況，來初步探尋其對膀胱癌細胞生物學影響的機制。
　　結果:
　　1、miR-430在膀胱癌組織中表達較正常組織組和癌旁組織組降低，且在膀胱癌組織中隨病理分期的增加而降低明顯。通過雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)驗證了miR-430與CXCR7之間存在靶向調(diào)控關系，miR-430能夠降低CXCR7在膀胱癌細胞中的表達。
　　2.成功建立了miR-430過表達慢病毒載體及CXCR7過表達真核質(zhì)粒載體。

6、>　　3、在人膀胱癌5637細胞株中使mir-430的強制過表達明顯抑制細胞增殖，遷移侵襲和克隆形成的能力，與CXCR7強制過表達的結果截然相反。
　　4.在人膀胱癌5637細胞株中miR-430的過表達能抑制ERK、p-ERK、MMP-2、MMP-9的表達，而上調(diào)TFAM表達卻促進ERK、p-ERK、MMP-2、MMP-9的表達。
　　結論:
　　本研究首先發(fā)現(xiàn)在正常膀胱、癌旁組織和膀胱癌組織中的mir-430的異常

7、表達。此外，在人膀胱癌5637細胞株中使mir-430的強制過表達明顯抑制細胞增殖，遷移侵襲和克隆形成的效率，與CXCR7強制過表達的結果截然相反，而CXCR7在本研究中已經(jīng)被驗證是miR-430的直接靶向目標。我們進一步的研究表明，在膀胱癌5637細胞株中過表達miR-430后與細胞增殖和遷移相關的基因包括ERK，p-ERK，MMP2和MMP9均明顯下調(diào)，而在過表達CXCR7的膀胱癌5637細胞株中這些基因的表達顯著上調(diào)。我們的研究首