MiR-34c、MiR-21、MiR-16、MiR-10b、MiR-200a、MiR-148b、MiR-Let-7i在原發(fā)性肝癌組織和癌旁組織間的差異表達及與血清腫瘤標志物水平的相關性研究.pdf

1、引言
　　miRNAs（microRNAs）是一類近年研究發(fā)現的短序列、非編碼、具有調控功能的小分子RNA，其在轉錄后水平對靶mRNAs進行負性調控。miRNAs作為細胞內重要的核酸調節(jié)分子，參與調控生物生長發(fā)育等重要的生命過程，并與眾多疾病發(fā)生發(fā)展密切相關，其中即包括腫瘤。
　　肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病原因和發(fā)病機制到目前為止尚未完全闡明，肝癌的發(fā)生是一個多因素參與的過程。研究表明miRNAs與癌基因和抑癌基因

2、的相互作用是包括肝癌在內的惡性腫瘤形成的機制之一。miRNAs參與調控很多癌基因和抑癌基因，或者受到這些基因的調節(jié)，有些癌基因或者抑癌基因已經明確為某一miRNA的靶作用分子。
　　目前，關于miRNAs在肝癌領域的研究主要集中于兩個方面：一方面為關于miRNAs差異表達譜的研究，其中包括肝癌細胞系miRNAs差異表達譜的研究，肝癌動物模型miRNAs差異表達譜的研究，臨床肝癌組織標本以及肝炎、肝硬化組織標本的miRNAs差異表達

3、譜的研究；另一方面為關于miRNAs靶基因和生理調節(jié)機制的研究。前者可為肝癌臨床診斷、治療和預后提供有關miRNAs的基礎信息，不同的研究機構所獲得的差異表達譜不盡相同，后者則致力于揭示某一個或者幾個miRNAs的調節(jié)機制以及與疾病發(fā)生發(fā)展的關系。
　　第四軍醫(yī)大學肝膽外科實驗室前期進行了關于肝癌細胞系和胎肝細胞系miRNAs差異表達譜的實驗研究，建立了大鼠肝癌細胞和胎肝細胞之間miRNAs的表達差異譜，我們在此基礎上查閱有關文獻

4、，選取研究報道與腫瘤發(fā)生有密切關系的七種miRNAs（miR-10b、miR-21、miR-34c、miR-16、miR-let7i、miR-200a、miR-148b），探討該七種miRNAs在原發(fā)性肝細胞肝癌中的差異表達情況。
　　目的
　　檢測MiR-34c、miR-21、miR-16、miR-10b、miR-200a、miR-148b及miR-Let-7i在原發(fā)性肝細胞肝癌組織和癌旁組織中的表達水平，并對七種miRN

5、As在原發(fā)性肝細胞肝癌組織和癌旁組織中的表達差異與腫瘤標志物AFP、CEA、CA19-9、CA125的血清水平進行相關性分析，探討肝癌診斷和預后可能的新標志。
　　方法
　　(1)收集臨床肝癌患者癌組織標本和癌旁組織標本以及肝癌患者的血液標本，整理收集患者病歷資料相關信息；
　　(2)用電化學發(fā)光免疫分析儀檢測肝癌患者的腫瘤標志物AFP、CEA、CA19-9、CA125血清水平；
　　(3)使用Trizol法提取

6、肝癌組織和癌旁組織中的總RNA；
　　(4)瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢驗總RNA質量；
　　(5)進行逆轉錄反應和實時定量PCR反應檢測七種microRNAs在原發(fā)性肝細胞肝癌組織和癌旁組織中的表達情況。
　　結果
　　(1)MiR-34c、miR-21、miR-16、miR-10b、miR-200a、miR-148b及miR-Let-7i在原發(fā)性肝細胞肝癌組織和癌旁組織中的表達差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.

7、05)。
　　(2)與癌旁組織相比，MiR-34c、miR-21、miR-16及miR-10b在肝癌組織中表達上調，miR-200a、miR-148b及miR-Let-7i在肝癌組織中表達下調，其中miR-200a和miR-148b下調明顯。
　　(3)miR-200a在肝癌和癌旁組織中的表達差異與患者血清AFP水平具有正相關性(r=0.8489，P<0.01)，即miR-200a在肝癌組織中的下調程度（與癌旁組織比較），與

8、患者血清AFP水平呈正相關。
　　(4)其余六種microRNAs的表達差異與患者腫瘤標志物AFP、CEA、CA19-9、CA125血清水平均無相關關系（P>0.05）。
　　結論
　　(1)MiR-34c、miR-21、miR-16、miR-10b、miR-200a、miR-148b及miR-Let-7i在原發(fā)性肝細胞肝癌和癌旁組織中存在表達差異，其中MiR-34c、miR-21、miR-16、miR-10b表達上調