大麥根尖和邊緣細(xì)胞鋁毒生物學(xué)特性及其機(jī)理研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文大麥根尖和邊緣細(xì)胞鋁毒生物學(xué)特性及其機(jī)理研究姓名：潘建偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：朱睦元2002.5.1不可逆的過(guò)程。通過(guò)基因工程方法導(dǎo)入凋亡抑制基因是作物抗逆性遺傳改良的一條新策略，也是細(xì)胞凋亡研究成果的具體應(yīng)用，目前國(guó)內(nèi)仍未見(jiàn)正式報(bào)道。本研究試圖通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將凋亡抑制基因ced09導(dǎo)入煙草，獲得高耐鋁性的轉(zhuǎn)基因植株。結(jié)果表明，利用pGEM一7z“)載體上的SacI和XbaI位點(diǎn)，將pBS載體上的

2、ced9基因成功地克隆到表達(dá)載體pBIl21(含CaMV35S)上，定名為pBIted一9。通過(guò)農(nóng)桿菌感染煙草葉盤(pán)，經(jīng)篩選、誘導(dǎo)和分化后，共獲得96株再生植株(To)。經(jīng)PCR檢測(cè)和Southern雜交表明，目的基因ced9已整合到煙草基因組中。有關(guān)轉(zhuǎn)基因植株的ced9表達(dá)活性及其對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育的影響、耐鋁性鑒定將在Tl、T2、T3代進(jìn)行。根邊緣細(xì)胞(BC)研究是最近幾年植物學(xué)和遺傳學(xué)的新領(lǐng)域之一。本實(shí)驗(yàn)表明，大麥CVHang981BC發(fā)育

3、啟動(dòng)與根發(fā)育幾乎同步，這與豆科植物BC發(fā)育不同。在懸空氣培中，大麥BC發(fā)育屬于非組成型表達(dá)的過(guò)程。在水培中，每個(gè)根每天仍釋放300350個(gè)BC，屬于組成型表達(dá)過(guò)程。根冠PME活性檢測(cè)表明，大麥BC發(fā)育與PME活性具有密切的相關(guān)性，PME活性在BC游離過(guò)程中起著重要作用。溫度對(duì)大麥根伸長(zhǎng)有明顯的抑制作用，但對(duì)BC發(fā)育影響不大。鋁毒對(duì)離體收集的BC活性影響非常明顯。大麥耐鋁品種CVHumai16的BC經(jīng)20和501tmoI／LAI處理后，其

4、活性無(wú)顯著性差異，而敏感品種CV20002的BC活性卻受到顯著抑制，說(shuō)明BC的耐鋁性與其個(gè)體植株水平的耐鋁性相一致。到目前為止，國(guó)內(nèi)外有關(guān)鋁毒對(duì)植物BC發(fā)育的影響仍未見(jiàn)正式報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)表明，鋁毒對(duì)大麥BC發(fā)育有明顯的抑制作用。20“m01／LAI對(duì)cv20002的BC發(fā)育有顯著性抑制(PO05)，但對(duì)CVHumai16的BC發(fā)育的影響不大。50umol／LAl對(duì)這兩個(gè)品種的BC發(fā)育均有顯著性抑制(P(Ooi)。PME活性檢測(cè)表明，鋁毒很