樹突狀細(xì)胞聯(lián)合LAK細(xì)胞的生物學(xué)特性研究.pdf

1、目的 觀察淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)與同源樹突狀細(xì)胞(DC)共培養(yǎng)后DC-LAK細(xì)胞增殖活性、表型的變化，及其對(duì)肺癌細(xì)胞株的殺傷效應(yīng)。 方法 采集12例健康成人自愿者的無菌靜脈血30毫升，密度梯度離心法分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞(PB-MC)，用RPMI 1640培養(yǎng)液，置培養(yǎng)箱培養(yǎng)2小時(shí)，收集非貼壁細(xì)胞加入重組白細(xì)胞介素-2(rhlL-2)用于誘導(dǎo)培養(yǎng)LAK細(xì)胞，貼壁細(xì)胞中加入重組白細(xì)胞介素-4(rhlL-4

2、)、重組粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導(dǎo)分化DC。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)和增殖情況。應(yīng)用流式細(xì)胞儀(FCM)測(cè)定細(xì)胞表型上變化鑒定這兩種細(xì)胞。將培養(yǎng)到第七天的兩種細(xì)胞，分成三組：第一組：①腫瘤凍融抗原刺激的肺腺癌細(xì)胞A549(DC-A549-LAK)組；②腫瘤凍融抗原刺激的小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H446(DC-NCI-H446-LAK)組，第二組：未加抗原刺激的DC-LAK組，第三組

3、：?jiǎn)渭兣囵B(yǎng)的LAK組(對(duì)照組)，繼續(xù)培養(yǎng)。倒置顯微鏡觀察每組細(xì)胞的增殖情況；用FCM測(cè)定細(xì)胞表型變化；利用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)效應(yīng)細(xì)胞在體外對(duì)人肺癌細(xì)胞株的殺傷活性。 結(jié)果 1．體外誘導(dǎo)單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)中加入細(xì)胞因子后，誘導(dǎo)出具有典型形態(tài)和免疫表型的DC和LAK細(xì)胞。2．共培養(yǎng)后DC-LAK細(xì)胞的免疫表型CD3、CD8、CD3<'+>CD8<'+>、CD3<'+>CD56<'+>的表達(dá)增加和細(xì)胞增殖率增加。經(jīng)抗原

4、沖擊后的DC-A549-LAK組及DC-NCI-H446-LAK組的CD3表達(dá)分別為(59.17±3.92)％和(60.89±4.39)％，顯著高于對(duì)照組(38.34±4.57)％(p<0.05)；CD8細(xì)胞最高表達(dá)為(54.56±1.60)％和(54.12±3.06)％，對(duì)照組為(28.99±4.17)％，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比有顯著性意義(p<0.05)；CD<'3>+CD8<'+>最高表達(dá)為(52.04±3.92)％和(50.79±3

5、.54)％，對(duì)照組(26.17±5.72)％，兩者相比有顯著性意義(p<0.05)；CD3<'+>CD56<'+>最高表達(dá)(40.56±1.09)％和(41.25±2.35)％，對(duì)照組(23.15±3.11)％，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比有顯著性意義(p<0.05)；CD4變化不明顯。在共培養(yǎng)第16天細(xì)胞增殖倍數(shù)：DC-A549-LAK組、DC-NCI-H446-LAK組分別是誘導(dǎo)前的(96.42±2.98)倍和(97.28±3.96)倍，DC

6、-LAK組是(81.42±2.12)倍，LAK對(duì)照組為(42.23±3.14)倍，兩者在增殖倍率上有顯著意義(p<0.05)。3．MTT顯示共培養(yǎng)后的LAK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞活性增強(qiáng)。DC-A549-LAK組對(duì)A549細(xì)胞的殺傷率為(86.92±7.78)％明顯高于LAK組的(56.97±9.30)％(P<0.05)，DC-NCI-H446-LAK組對(duì)NCI-H446細(xì)胞的殺傷率為(84.56±8.01)％，明顯高于LAK組的(46.28