（節(jié)選）2015年--遺傳學(xué)外文翻譯--抗血凝素糖形驅(qū)動(dòng)b細(xì)胞的免疫親和力選擇并決定流感疫苗效力（譯文）

1、<p><b>　　中文6636字</b></p><p>　　出處：Wang T, Maamary J, Tan G, et al. Anti-HA Glycoforms Drive B Cell Affinity Selection and Determine Influenza Vaccine Efficacy.[J]. Cell, 2015, 162(1):160–169.

2、</p><p>　　抗血凝素糖形驅(qū)動(dòng)B細(xì)胞的免疫親和力選擇并決定流感疫苗效力</p><p>　　Taia T. Wang, Jad Maamary, Gene S. Tan, Stylianos Bournazos, Carl W. Davis, Florian Krammer, Sarah J. Schlesinger, Peter Palese, Rafi Ahmed, and J

3、effrey V. Ravetch</p><p><b>　　概要</b></p><p>　　有保護(hù)作用的疫苗可以通過(guò)免疫復(fù)合物（ICs）中人體各處高度變異的B細(xì)胞抗原受體(BCR)的選擇作用誘導(dǎo)出高免疫親和力的使抗原失活的抗體。這表明Fc-Fc受體(FcR)參與抗體免疫親和力的成熟過(guò)程，同時(shí)由免疫復(fù)合物中免疫球蛋白G(IgG)亞類和Fc多糖結(jié)構(gòu)決定。三價(jià)流感病毒

4、疫苗誘導(dǎo)抗血凝素IgG亞類和Fc多糖的調(diào)控，同時(shí)唾液酸Fc多糖(sFc)的豐富度可以預(yù)見(jiàn)疫苗反應(yīng)的質(zhì)量。我們發(fā)現(xiàn)sFcs通過(guò)結(jié)合II型FcR CD23來(lái)驅(qū)動(dòng)BCR免疫親和力選擇，從而上調(diào)活性B細(xì)胞上受抑制的FcγRIIB。這提高了BCR信號(hào)的閾值需求，使得B細(xì)胞選擇出更高免疫親和力的BCR。有sFc、血凝素(HA)、ICs參與的免疫誘導(dǎo)出保護(hù)性的、高免疫親和力的IgG來(lái)對(duì)抗HA的保守追蹤（？）。這些結(jié)果顯露了一條新奇的、內(nèi)源的，使免疫親

5、和力趨于成熟的，可被用于通過(guò)唾液酸免疫復(fù)合體參與的免疫過(guò)程誘導(dǎo)出高免疫親和力的、使抗原完全失效的抗體的通路。</p><p><b>　　介紹</b></p><p>　　IC-FcR相互作用促成了一大批需要疫苗誘導(dǎo)的、保護(hù)性的、成熟的抗體反應(yīng)的細(xì)胞過(guò)程，包括把抗原運(yùn)送到生發(fā)中心的高效運(yùn)輸，濾泡輔助性T細(xì)胞的活化，以及高免疫親和力的B細(xì)胞的選擇。確實(shí)，F(xiàn)cR發(fā)出信號(hào)對(duì)

6、于保持正負(fù)信號(hào)的平衡，達(dá)到最適免疫應(yīng)答的極致，大體上是盡責(zé)的。兩種基本類型的FcR已被識(shí)別：I型FcR是免疫球蛋白超家族的成員，包括FcγRI，II和III，II型FcR是C型凝集素家族的成員，包括DC-SIGN和CD23.任一信號(hào)臂（？）的攝動(dòng)均會(huì)導(dǎo)致抗體免疫親和力和外周耐受的改變。IC-FcR相互作用可以引起活化、抑制或調(diào)節(jié)的細(xì)胞信號(hào)，取決于FcRs引發(fā)的模式，而這是由IC內(nèi)部FcR結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)決定的。Fc的結(jié)構(gòu)反過(guò)來(lái)受到IgG亞類

7、和Fc多糖的組合方式調(diào)節(jié)。</p><p>　　IgG抗體在人體中以四種亞類的形式存在(IgG1-4)，血漿中IgG1含量最豐富，IgG2-4含量依次降低。這是由本研究的十位成年健康志愿者的基準(zhǔn)（預(yù)接種）抗凝血素IgGs的亞類分布顯示出來(lái)的。每個(gè)亞類按照其結(jié)合-活化比分布：抑制的I型FcγRs，以及IgG1和IgG3有著最高的活化受體親和力。</p><p>　　Fc多糖是一種復(fù)雜的，通過(guò)

8、N-鍵連接在IgG每條重鏈的Cγ2結(jié)構(gòu)域內(nèi)Asn-297上的雙觸角結(jié)構(gòu)，它的存在對(duì)所有的Fc-FcR結(jié)合作用都很必要。核心的Fc七糖結(jié)構(gòu)可以通過(guò)加上特殊的糖單位（海藻糖[F]，乙酰氨基葡萄糖[N]，半乳糖[G]和唾液酸[S]）修飾；這些修飾是動(dòng)態(tài)的，作用是通過(guò)調(diào)整Fc結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)IC-FcR相互作用，進(jìn)而調(diào)節(jié)IgG分子生物活性。在基線上，大部分IgG的Fc糖形都是“中性”結(jié)構(gòu)，由海藻糖的存在和唾液酸的不存在決定。sFc存在，豐富度約5%-2

9、0%；去巖藻糖基化的糖形也被發(fā)現(xiàn)，豐富度約5%-15%。該分布是由本研究的病人群體的抗血凝素IgG1上的基準(zhǔn)Fc糖形結(jié)構(gòu)揭示的。</p><p>　　生物學(xué)上Fc糖形結(jié)構(gòu)最重要的修飾是唾液酸化和巖藻糖基化：唾液酸的存在會(huì)抑制I型Fc受體結(jié)合，而海藻糖的存在會(huì)促進(jìn)與活化的I型FcγRIIIa的結(jié)合。只存在唾液酸是Fc-II型FcR結(jié)合的決定因素。唾液酸化有著增強(qiáng)Cγ2結(jié)構(gòu)域構(gòu)象靈活性的效應(yīng)，使Fc表現(xiàn)出更“封閉”的

10、構(gòu)形，從而使II型FcR的結(jié)合位點(diǎn)暴露出來(lái)，同時(shí)相對(duì)地降低結(jié)合I型FcR的可能性。因此Fc多糖唾液酸化代表了一種通過(guò)Fc構(gòu)造在開(kāi)放和封閉間的交替調(diào)節(jié)免疫球蛋白類的感受器活性，從而分別調(diào)節(jié)Fc與I型還是II型FcR結(jié)合的機(jī)制。針對(duì)這種一分為二的乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)修飾的研究展示了提高I型FcγRIIIa免疫親和力的可能性；然而，去巖藻糖基化是強(qiáng)FcγRIIIa結(jié)合的一種更有潛力的決定因素。只向分杈的Fc的一臂或兩臂加半乳糖不影響

11、FcR結(jié)合，但是很重要，因?yàn)榘肴樘擒栈峭僖核峄囊粋€(gè)先決條件。</p><p>　　IgG的Fc結(jié)合特異性從I型轉(zhuǎn)變成II型FcRs可造成顯著的體內(nèi)效應(yīng)，對(duì)sFc豐富度清晰的調(diào)控可能是一種基本的自我平衡的過(guò)程。增強(qiáng)II型FcR信號(hào)的一個(gè)已知結(jié)果是抗炎，一個(gè)典型例子就是大劑量靜脈注射免疫球蛋白(IVIG)的抗炎治療。IVIG中的sFcs通過(guò)結(jié)合固有效應(yīng)細(xì)胞上II型FcR DC-SIGN來(lái)發(fā)揮作用，刺激IL-33生

12、產(chǎn)，引發(fā)后面的抗炎過(guò)程。I型和II型FcR信號(hào)平衡的崩潰可能發(fā)生在幾種炎性疾病中，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和肉芽腫病合并多血管炎，這些疾病會(huì)相對(duì)降低sFc的豐富度，這種sFc被發(fā)現(xiàn)于自身抗體如抗瓜氨酸肽(ACPA)和抗蛋白酶3(PR3)抗體。疾病惡化時(shí)抗ACPA和抗PR3Fcs的唾液酸化程度降低，而疾病好轉(zhuǎn)與上述抗體的Fc多糖唾液酸化程度提高相關(guān)。</p><p>　　正如唾液酸調(diào)控Fc糖形在炎癥過(guò)程的調(diào)節(jié)中發(fā)揮了重要作

13、用，分支上海藻糖的存在與否調(diào)節(jié)著IgG Fcs與FcγRIIIa的相互作用來(lái)促進(jìn)或抑制IgG調(diào)節(jié)的抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用(ADCC)和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞活動(dòng)。去巖藻糖基化的Fc結(jié)構(gòu)域增強(qiáng)了與活化受體FcγRIIIa的免疫親和力，這是由FcγRIIIa上的N-多糖和去巖藻糖基化的Fc多糖之間穩(wěn)定相互作用造成的。從單克隆的治療用抗體如利妥昔單抗和曲妥單抗上移除海藻糖增加了與FcγRIIIa的結(jié)合，從而增強(qiáng)ADCC活性，進(jìn)而增強(qiáng)了它

14、們的臨床效果。如同唾液酸化的糖形，伴隨Fc多糖上海藻糖層次的調(diào)節(jié)的疾病暗示了Fc巖藻糖基化的嚴(yán)格調(diào)節(jié)；一個(gè)例子就是胎兒或新生兒同種免疫性血小板減少癥，患兒對(duì)人血小板抗原(HPA)專一性的IgG巖藻糖基化Fc多糖的水平顯著降低了，去巖藻糖基化的HPA抗體的水平與疾病嚴(yán)重程度有關(guān)。</p><p>　　Fc多糖調(diào)節(jié)可能導(dǎo)致自分泌B細(xì)胞通過(guò)IC-FcR相互作用發(fā)出信號(hào)，可能指導(dǎo)對(duì)疫苗接種的抗體反應(yīng)，這一點(diǎn)是由對(duì)Fc多糖

15、構(gòu)造可隨接種發(fā)生變化，以及sFc可以結(jié)合CD23（一種表達(dá)在活化B細(xì)胞上的II型FcR）的觀察揭示的。當(dāng)前的研究被設(shè)計(jì)用來(lái)判定疫苗抗原-IgG ICs內(nèi)部的Fc結(jié)構(gòu)是否作為包含在抗體反應(yīng)的成熟內(nèi)的指導(dǎo)FcR調(diào)節(jié)的過(guò)程的機(jī)制被調(diào)控。我們的方法是描述Fc結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)性決定因素（IgG亞類和Fc多糖構(gòu)造）在健康對(duì)象身上應(yīng)用三聯(lián)流感病毒疫苗(TIV)誘導(dǎo)產(chǎn)生的IgGs上的調(diào)節(jié)。下一步，我們進(jìn)行了一系列控制實(shí)驗(yàn)來(lái)判定這種調(diào)節(jié)在決定疫苗反應(yīng)時(shí)扮演了

16、何種角色（如果存在）。在保護(hù)性疫苗反應(yīng)形成過(guò)程中對(duì)Fc結(jié)構(gòu)域的自然調(diào)節(jié)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明免疫策略，包括含sFc的ICs的管理誘導(dǎo)產(chǎn)生廣譜保護(hù)性的抗體來(lái)對(duì)抗流感病毒。</p><p><b>　　結(jié)果</b></p><p>　　TIV誘導(dǎo)的IgG上Fc結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)特性描述</p><p>　　健康成年人注射了2012-2013TIV疫苗。血清（？）被

17、畫在基線上（接種前），第七天、第三周、第五周、第七周進(jìn)行后續(xù)接種，抗原特異性IgGs被分離以便后續(xù)對(duì)Fc多糖構(gòu)造和IgG亞類的分析。在基線上，使用同源的病毒通過(guò)H1結(jié)合酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)和血凝抑制試驗(yàn)(HAI)測(cè)試，所有對(duì)象抗H1 HA疫苗組分，A/California/04/2009（H1N1病毒），的IgG都呈陽(yáng)性?；鶞?zhǔn)的抗H1 IgG按亞類分布和Fc多糖構(gòu)造進(jìn)行特征性描述?；鶞?zhǔn)抗H1 IgG上Fc糖形主要是中性的，在不

18、同對(duì)象間取值范圍是66.3%-88.3%，GlcNAc含量范圍是6.2%-14.6%，唾液酸化糖形含量范圍是4.6%-18.5%，去巖藻糖基化多糖的含量范圍是4.27%-15.07%?；鶞?zhǔn)抗H1 IgG和總IgG相比含有顯著更多的sFc和更少的巖藻糖基化Fc(FucFc)，但亞類分布沒(méi)有不同。</p><p>　　后續(xù)接種中觀察到了對(duì)H1特異性IgG上sFc糖形豐富度的調(diào)節(jié)。sFc糖形豐富度顯著升高了，在接種后第

19、7天達(dá)到峰值；這反映在第7天fucFc的增加。sFc糖形和抗H1 IgG上的fucFc直到第7周一直高于接種前水平，除了接種后第3周有明顯的下降。</p><p>　　因?yàn)镕c多糖的半乳糖苷化是唾液酸化的先決條件，半乳糖的存在可以作為決定唾液酸調(diào)節(jié)豐富度的限制因素。分析顯示半乳糖(GalFc)水平在接種后受到一種微弱但統(tǒng)計(jì)上顯著的程度的調(diào)節(jié)，但是在每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)半乳糖苷化多糖的總豐富度都超過(guò)90%。這比唾液酸化多糖

20、高出幾倍，表明唾液酸化不是受到半乳糖苷化的限制，而是受到獨(dú)立的調(diào)節(jié)。二分的乙酰氨基葡萄糖糖形(bGlcNAcFc)不受顯見(jiàn)調(diào)節(jié)。</p><p>　　除了接種后對(duì)Fc糖形的調(diào)節(jié)，對(duì)單一時(shí)間點(diǎn)（第3周）的HA專一性IgG的分析表明專一性Fc糖形可以和抗原結(jié)合片段(Fab)的專一性相連（？），可能由于糖基化的不同，這種不同是由產(chǎn)生IgG的B細(xì)胞亞群如成漿細(xì)胞(PB)和記憶B細(xì)胞的不同實(shí)現(xiàn)的?？笻A（主要是球狀頭部專一

21、性）和抗HA桿狀抗體在Fc糖形輪廓上有顯著差異，唾液酸化和巖藻糖基化的多糖水平在總抗HA IgG中最高但在抗HA桿狀I(lǐng)gG中最低。沒(méi)有觀察到二分的乙酰氨基葡萄糖水平的差異。接種后第7天的特征是抗H1 IgG上sFc增多，這會(huì)使ICs中II型FcR結(jié)合增多。相反地，接種后第3周的特征是sFc減少，去巖藻糖基化Fc(afucFc)增多，這會(huì)使信號(hào)平衡向活化I型FcR移動(dòng)。第3周Fc糖形構(gòu)造向活化I型FcR信號(hào)偏移是從抗H1 IgG亞類分布的

22、調(diào)節(jié)反映出來(lái)的，IgG1豐富度中位數(shù)從基準(zhǔn)的35.2%增加到第3周時(shí)的75.18%。</p><p>　　接種后Fc糖形的存在反映了活化B細(xì)胞亞群內(nèi)糖基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)</p><p>　　接種后第7天唾液酸化和巖藻糖基化的Fc多糖達(dá)到峰值反映了研究對(duì)象外周血中成漿細(xì)胞豐富度達(dá)到峰值，與應(yīng)用TIV后發(fā)生的成漿細(xì)胞擴(kuò)張動(dòng)力學(xué)的完整描述一致。此外，早期成漿細(xì)胞反應(yīng)期間產(chǎn)生的抗H1 IgG的量與接種

23、后前7天抗HA IgG上sFc豐富度的變化相關(guān)(p=0.0065).這些發(fā)現(xiàn)使我們猜測(cè)唾液酸化和巖藻糖基化的Fc糖形可能是由PB產(chǎn)生的，至少是一部分地。因?yàn)榈?天到第3周afucFc和去唾液酸化的Fc糖形豐富度的相關(guān)性增加反映了病人群體外周記憶B細(xì)胞微小的增加，正如先前描述的那樣，我們猜測(cè)那些糖形可能源于記憶B細(xì)胞。對(duì)PB和記憶B細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)相關(guān)的糖基轉(zhuǎn)移酶染色表明PB相比記憶B細(xì)胞ST6Gal1表達(dá)增加，F(xiàn)UT8表達(dá)不顯著增加。此外，對(duì)

24、接受2009-10TIV的6位患者身上提取的第7天PB和記憶B細(xì)胞進(jìn)行基因分析，結(jié)果表明PB相比記憶B細(xì)胞ST6Gal1 (p=0.06)和FUT8(p=0.03)的表達(dá)增加，支持了由PB產(chǎn)生，較少的唾液酸化和巖藻糖基化的Fc多糖由記憶細(xì)胞的可能性。不像ST6Gal1和FUT8，B4GALT1（編碼一種參與Fc多糖調(diào)節(jié)的半乳糖基轉(zhuǎn)移酶）在PB中沒(méi)有顯著</p><p>　　唾液酸化Fc豐富度可以預(yù)測(cè)流感病毒疫苗效

25、果，這是由接種后HAI+滴度的改變決定的</p><p>　　為了調(diào)查TIV接種后Fc多糖構(gòu)造受控改變的重要性，我們?cè)u(píng)估了特定Fc糖形的豐富度和血凝滴度(HAI)變化（TIV效果的一個(gè)常用測(cè)度）的聯(lián)系。特別地，鑒于已經(jīng)觀察到接種后第7天HA專一性成漿細(xì)胞的擴(kuò)張程度與疫苗反應(yīng)有不緊密的聯(lián)系，我們調(diào)查了第7天唾液酸化IgG的產(chǎn)生以及在第3周通過(guò)HAI滴度測(cè)量的疫苗效果之間的任何聯(lián)系。確實(shí)，接種后第1周抗HA IgG上

26、唾液酸化Fc糖形豐富度的變化可以預(yù)見(jiàn)隨后的HAI活性增強(qiáng)。另外，唾液酸化糖形的豐富度預(yù)測(cè)了接種后第3周抗HA IgG的免疫親和力。這些數(shù)據(jù)表明應(yīng)用TIV后產(chǎn)生的唾液酸化Fc糖形的豐富度可以調(diào)節(jié)總體的疫苗反應(yīng)的質(zhì)量。</p><p>　　ICs中唾液酸化Fc糖形通過(guò)CD23依賴的方式引發(fā)B細(xì)胞上FcγRIIB的上調(diào)</p><p>　　為了判斷免疫復(fù)合體中sFc調(diào)節(jié)B細(xì)胞活性的可能機(jī)制，我們

27、通過(guò)多種體內(nèi)體外試驗(yàn)研究了sFc ICs對(duì)B細(xì)胞的影響。與原始sFc水平（17.6%，抗HA IgG）或唾液酸苷酶處理來(lái)移除原始的唾液酸（去唾液酸化）共同使用的接種后第3周的IgG，與California/04/2009(Cal/09)H1 HA蛋白復(fù)合形成唾液酸化或去唾液酸化IC(sIC或aIC)。這些ICs和人類CD19+外周血單核細(xì)胞(PBMCs)一同培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后分析顯示FcγRIIB，抑制的I型Fc受體，在與sIC共同培養(yǎng)

28、的細(xì)胞上表達(dá)增加，而在與aIC或只與HA蛋白共同培養(yǎng)的細(xì)胞上沒(méi)有此現(xiàn)象。相似地，一個(gè)重組抗HA單克隆抗體(mAb)PY102，與唾液酸化Fc糖形（23.7%sFc）或去唾液酸化Fc糖形共同表達(dá)，然后與A/PR8/1934 (PR8)H1 HA蛋白混合來(lái)產(chǎn)生sIC或aIC。這些mAb ICs隨后與人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系（BJAB細(xì)胞）一同培養(yǎng)，與初級(jí)B細(xì)胞試驗(yàn)類似，與sIC而不是aIC或單獨(dú)的HA蛋白共同培養(yǎng)的mAb ICs可以引起FcγR

29、IIB表達(dá)的增加。</p><p>　　接下來(lái)，為了判斷唾液酸化ICs在體內(nèi)如何影響B(tài)細(xì)胞，對(duì)實(shí)驗(yàn)鼠使用人類接種后產(chǎn)生的IgG/Cal/09 HA ICs (sIC 和aIC)，3周后用HA蛋白進(jìn)行加強(qiáng)。加強(qiáng)后10天，分析外周B細(xì)胞FcγRIIB的表達(dá)；小鼠sIC處理的的抗原專一性外周B細(xì)胞FcγRIIB表達(dá)增加，反之a(chǎn)ICs處理組沒(méi)有表現(xiàn)出那樣的增強(qiáng)。相似地，由mAb PY102和PR8 HA蛋白制成的sIC或

30、aIC被注射入小鼠體內(nèi)；接種后3天，用sIC而非aIC或單獨(dú)的HA進(jìn)行免疫處理的小鼠生發(fā)中心B細(xì)胞的FcγRIIB表達(dá)增加。因?yàn)镃D23是B細(xì)胞表達(dá)的唯一的II型FcR，我們接下來(lái)判斷FcγRIIB的上調(diào)是否依賴于CD23的表達(dá)。CD23缺乏的小鼠生發(fā)中心B細(xì)胞沒(méi)有表現(xiàn)出FcγRIIB的上調(diào)，證明sICs借助CD23增強(qiáng)B細(xì)胞FcγRIIB的上調(diào)。</p><p>　　唾液酸化ICs誘導(dǎo)產(chǎn)生的IgG抗原免疫結(jié)合力

31、更強(qiáng)</p><p>　　我們知道FcγRIIB表達(dá)增加基于BCR免疫結(jié)合力提高B細(xì)胞選擇閾值，因此我們對(duì)sICs參與免疫誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗HA IgG的免疫結(jié)合力進(jìn)行描述。人類接種后IgG/Cal/09 HA ICs誘導(dǎo)產(chǎn)生IgGs的免疫結(jié)合力通過(guò)ELISA法，這是一種由用于抗HA IgGs評(píng)價(jià)的硝基苯基系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)節(jié)的方法；該法測(cè)量高免疫親和力的結(jié)合IgGs占全部免疫親和力的結(jié)合IgGs的比例。Cal/09 HA1亞

32、基的免疫親和力也通過(guò)測(cè)量7M尿素治療后保持結(jié)合態(tài)的IgG的量的方法進(jìn)行評(píng)估。sIC處理方案誘導(dǎo)產(chǎn)生的IgG對(duì)Cal/09 HA1（主要是球狀頭部），H1亞型HA蛋白的高度保守桿狀結(jié)構(gòu)域，和完整的Cal/09 HA糖蛋白有顯著更高的免疫親和力。與應(yīng)用sIC處理方案的CD23缺乏小鼠缺少FcγRIIB上調(diào)過(guò)程的現(xiàn)象一致，CD23缺乏小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生的IgG沒(méi)有表現(xiàn)出更強(qiáng)的免疫親和力。mAb PY102/PR8 HA ICs誘導(dǎo)產(chǎn)生的IgGs

33、對(duì)PR8 H1蛋白或PR8桿狀結(jié)構(gòu)域的免疫親和力用表面等離子體共振(SPR)分析進(jìn)行評(píng)估。研究發(fā)現(xiàn)sIC處理的小鼠的抗HA IgG的多克隆血清抗體離解率是aIC處理的小鼠</p><p>　　更高免疫親和力的IgGs調(diào)節(jié)對(duì)抗H1N1流感病毒的廣泛保護(hù)</p><p>　　為了判斷與抗HA IgG免疫結(jié)合力的提高有聯(lián)系的任何功能意義，我們測(cè)試了人類接種后多克隆IgG/Cal/09 HA IC

34、或單獨(dú)的HA蛋白處理的小鼠產(chǎn)生的混合IgG（來(lái)自上一實(shí)驗(yàn)的血清）的保護(hù)活性。使用混合IgG和使用病毒HAI終點(diǎn)滴度相當(dāng)，表明用于接種的同源HA(A/Netherlands/602/2009)和Cal/09或Cal/09桿狀蛋白有著相當(dāng)?shù)慕Y(jié)合活性。為了進(jìn)行激發(fā)試驗(yàn)，病毒在鼻內(nèi)感染前用純化的IgG進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)；這樣質(zhì)量損失就是和混合IgG一起培養(yǎng)后感染性病毒殘余部分的作用。在激發(fā)試驗(yàn)中，我們觀察到了相當(dāng)?shù)目笻1N1病毒A/Netherland

35、s/602/2009保護(hù)作用，這說(shuō)明同源HA可用于疫苗接種。相反地，當(dāng)我們用一種表達(dá)由高度保守的H1桿狀結(jié)構(gòu)域和一個(gè)無(wú)關(guān)的頭部亞型結(jié)構(gòu)域(H5)組成的嵌合血凝素分子(cH5/1)的病毒，只評(píng)估抗桿狀結(jié)構(gòu)域IgGs的保護(hù)活性時(shí)，我們觀察到了混合IgG保護(hù)潛能的一個(gè)不同。只有sIC處理的細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的更高免疫親和性的IgGs有抗桿狀結(jié)構(gòu)域介入的保護(hù)性。</p><p>　　下一步，我們使用mAb PY102/PR8

36、HA IC免疫處理的小鼠（sIC處理野生型小鼠、sIC處理CD23缺乏小鼠或aIC處理）和只用PR8 HA處理的小鼠IgG進(jìn)行了等價(jià)激發(fā)試驗(yàn)。純化的混合IgG和PR8 HA有同等的結(jié)合效價(jià)。小鼠受到A/PR8/1934病毒的激發(fā)，這表明同源H1 HA可用于疫苗接種，還有像之前一樣，完全的保護(hù)需要所有IgG共同作用來(lái)實(shí)現(xiàn)。相反地，只有sIC誘導(dǎo)產(chǎn)生的IgG能使小鼠應(yīng)對(duì)A/FM/1/1947 H1N1病毒和A/Netherlands/602

37、/2009 H1N1病毒的激發(fā)，證明保護(hù)的廣度是由sIC誘導(dǎo)產(chǎn)生的更高免疫親和力的IgG提供的。</p><p><b>　　討論</b></p><p>　　早期成漿細(xì)胞反應(yīng)產(chǎn)生的sFc被發(fā)現(xiàn)與隨后的HAI+抗體生產(chǎn)有關(guān)，這暗示了保護(hù)性TIV反應(yīng)在個(gè)體發(fā)生學(xué)上可能需要免疫調(diào)變劑II型FcR信號(hào)。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明免疫復(fù)合體中的sFc引起B(yǎng)細(xì)胞FcγRIIb的上調(diào)，從而

38、調(diào)節(jié)B細(xì)胞的選擇為偏好表達(dá)更高免疫親和力的BCR。我們的研究提出了一個(gè)通過(guò)TIV接種引起成漿細(xì)胞擴(kuò)張和sFc IgG生產(chǎn)的模型。免疫復(fù)合體通過(guò)活化B細(xì)胞上II型FcR CD23用sFc IgG信號(hào)生成，引起FcγRIIb表達(dá)的增加。這導(dǎo)致了BCR免疫親和力（B細(xì)胞生存所需）閾值的提高，最終導(dǎo)致更高免疫親和力，更有潛能的保護(hù)性IgG的生成。</p><p>　　幾個(gè)實(shí)驗(yàn)（含本實(shí)驗(yàn)）已經(jīng)發(fā)現(xiàn)抗HA IgG的基準(zhǔn)滴度與

39、TIV反應(yīng)的程度成負(fù)相關(guān)，以致低基準(zhǔn)滴度預(yù)示著更強(qiáng)的疫苗反應(yīng)。低基準(zhǔn)抗HA滴度也預(yù)示著成漿細(xì)胞活動(dòng)頻率和接種后第7天sFc糖形生產(chǎn)的增加?？偟膩?lái)說(shuō)，低基準(zhǔn)的抗HA IgG預(yù)示著接種后1周內(nèi)成漿細(xì)胞的大擴(kuò)張和唾液酸化糖形的大量生產(chǎn)，導(dǎo)致HAI+ IgG的巨大變化。值得注意的是，第7天唾液酸化Fc糖形的更大規(guī)模生產(chǎn)也可以由基準(zhǔn)唾液酸化Fc豐富度預(yù)測(cè)，更低的基準(zhǔn)唾液酸化糖形豐富度與隨后sFc生產(chǎn)擴(kuò)大有關(guān)。</p><p&g

40、t;　　保護(hù)性抗桿狀結(jié)構(gòu)域IgGs可被唾液酸化ICs誘導(dǎo)產(chǎn)生這一發(fā)現(xiàn)和抗桿狀結(jié)構(gòu)域IgGs可以調(diào)節(jié)對(duì)抗不同抗原流感病毒的廣譜保護(hù)同樣重要。一項(xiàng)從觀察到唾液酸化免疫復(fù)合體可以驅(qū)動(dòng)對(duì)更高免疫親和力的B細(xì)胞進(jìn)行選擇這一現(xiàn)象獲得啟示的實(shí)際應(yīng)用將作為一種選擇性地誘導(dǎo)產(chǎn)生高免疫親和力的抗桿狀結(jié)構(gòu)域IgGs策略投入使用，從而產(chǎn)生更廣泛更有潛力的抗HA反應(yīng)。這項(xiàng)發(fā)現(xiàn)還暗示了對(duì)保護(hù)性抗桿狀結(jié)構(gòu)域IgGs的免疫親和力需求：針對(duì)球狀頭部專一性抗體的該類IgG

41、s尚不存在；我們可能需要抗桿狀結(jié)構(gòu)域IgGs有更強(qiáng)的免疫親和力來(lái)限制低pH條件下HA的構(gòu)造改變，從而保護(hù)宿主細(xì)胞上病毒外殼的融合物。</p><p>　　因?yàn)槠胶獾腇cR信號(hào)是產(chǎn)生專一性免疫反應(yīng)的需要，對(duì)ICs內(nèi)Fc結(jié)構(gòu)域的嚴(yán)格調(diào)控必須發(fā)生。我們發(fā)現(xiàn)這種調(diào)控發(fā)生在暴露于抗原后，通過(guò)Fc結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)的決定因素間的同步調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)。觀察到的接種后數(shù)周內(nèi)的這些變化會(huì)在B細(xì)胞濾泡內(nèi)調(diào)節(jié)I型和II型FcR信號(hào)，那是抗原可在暴露后

42、被保留數(shù)月乃至數(shù)年的地方。隨TIV的接種而擴(kuò)張的PB是第7天觀察到的sFc IgG的可能來(lái)源，而記憶B細(xì)胞可能幫助生產(chǎn)巖藻糖基化、唾液酸化程度較低的Fc糖形（第3周被觀察到）。記憶B細(xì)胞生產(chǎn)巖藻糖基化、唾液酸化程度較低的Fc糖形可能受到這些糖形在對(duì)HA高度保守的桿狀結(jié)構(gòu)域?qū)Ｒ恍缘腎gGs上有更高的豐富度這一發(fā)現(xiàn)的支持。Fc糖形和IgG亞類分布均發(fā)生向Fc結(jié)構(gòu)域的偏移，表現(xiàn)為第3周I型FcR結(jié)合增加?；罨疘型FcR信號(hào)增加的一個(gè)可能的功能

43、性解釋是在延長(zhǎng)的抗原暴露或感染中發(fā)生了吞噬細(xì)胞活性增強(qiáng)的適應(yīng)性機(jī)制。</p><p>　　我們?nèi)孕枰M(jìn)一步的研究來(lái)仔細(xì)分析在體液免疫進(jìn)化的過(guò)程中Fc糖形調(diào)節(jié)的無(wú)疑是相當(dāng)復(fù)雜的功能角色，包括唾液酸化和低海藻糖的糖形，因?yàn)樗鼈兛赡軈⑴c生發(fā)中心內(nèi)部除B細(xì)胞活化和選擇外多個(gè)過(guò)程的調(diào)節(jié)。</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)過(guò)程（略）</b></p><p>

44、;<b>　　臨床研究</b></p><p>　　重組蛋白和免疫復(fù)合體的產(chǎn)生</p><p><b>　　Fc多糖分析</b></p><p><b>　　酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定</b></p><p><b>　　血細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn)</b></p>

45、;<p>　　表面等離子體共振分析</p><p><b>　　體外研究</b></p><p><b>　　體內(nèi)研究</b></p><p><b>　　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析</b></p><p><b>　　補(bǔ)充信息（略）</b></p&g