生物科學(xué)畢業(yè)論文長(zhǎng)蛸不同群體issr分析

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　長(zhǎng)蛸不同群體ISSR分析</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 生物科學(xué)

2、 </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄</b></p

3、><p>　　摘要錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p>　　Abstract錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p><b>　　引言1</b></p><p><b>　　1材料與方法3</b></p><p>　　1.1實(shí)驗(yàn)材料3</p><p>

4、;　　1.2實(shí)驗(yàn)儀器3</p><p>　　1.3實(shí)驗(yàn)方法3</p><p>　　1.3.1長(zhǎng)蛸基因組DNA的提取3</p><p>　　1.3.2檢測(cè)長(zhǎng)蛸基因組DNA4</p><p>　　1.3.3長(zhǎng)蛸ISSR-PCR4</p><p>　　1.3.4長(zhǎng)蛸數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析4</p>

5、<p>　　2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析6</p><p>　　2.1不同居群的遺傳多樣性6</p><p>　　2.2遺傳變異與分化7</p><p><b>　　3討論8</b></p><p>　　3.1長(zhǎng)蛸的遺傳多樣性8</p><p><b>　　小結(jié)9&

6、lt;/b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)11</b></p><p>　　致謝錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p><b>　　摘要</b></p><p>　　[摘要] 本文采用ISSR-PCR技術(shù)對(duì)長(zhǎng)蛸基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，篩選分析了ISSR-PCR擴(kuò)增時(shí)的主要影響因子：

7、包括Mg2+濃度、引物濃度、dNTPs濃度、Taq酶濃度以及退火溫度等，建立了長(zhǎng)蛸ISSR優(yōu)化體系。最終確立的25 μl優(yōu)化體系為：Mg2+，1.5 m mol/L，Taq DNA聚合酶1.0 U，引物0.15μmol/L，dNTPs 2.0 m mol/L，退火溫度為52.2℃。并用7條ISSR引物對(duì)舟山、溫州兩個(gè)野生群體進(jìn)行了遺傳多樣性分析，共得到118個(gè)清晰的擴(kuò)增位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)55個(gè)，多態(tài)位點(diǎn)率為46.59%。其中舟山群體多

8、態(tài)位點(diǎn)比例為46.61%，Nei's基因多樣性為0.1633±0.2044 ，Shannon's多樣性指數(shù)為0.2417±0.2916。溫州多態(tài)位點(diǎn)比例為44.07%。Nei's基因多樣性為0.1510±0.1971，Shannon's多樣性指數(shù)為0.2253±0.2830，研究結(jié)果表明舟山長(zhǎng)蛸野生群體遺傳多樣性水平高于溫州長(zhǎng)蛸野生群體。</p>&l

9、t;p>　　[關(guān)鍵詞] 長(zhǎng)蛸；ISSR；體系優(yōu)化；遺傳多樣性。</p><p><b>　　Abstract</b></p><p>　　[Abstract] This study adopted ISSR-PCR amplification technology on Octopus variabilis genome DNA, and analyzed

10、the main influencing factors, including the concentration of Mg2+, Taq DNA polymerase, dNTPs, the primers, as well as the annealing temperature, and established the suitable ISSR-PCR system for Octopus variabilis. The re

11、action system with a total volume of 25μl was as the following: Mg2+ 1.5 mmol/L, Taq DNA polymerase 1.0 U, primer 0.15 mmol/L, dNTPs 2.0 mmol/L, the annealing temperatur</p><p>　　[Key words] Octopus variabi

12、lis; ISSR; System Optimization; Genetic.</p><p><b>　　引言</b></p><p>　　長(zhǎng)蛸(Octopus variabilis)，隸屬于軟體動(dòng)物門(mén)，頭足綱，八腕目，蛸科(Octopodidae)，俗稱長(zhǎng)八帶魚(yú)（短蛸俗稱八帶魚(yú)）、鲅須[1]。在我國(guó)南北各海區(qū)均有廣泛分布，其中北部海區(qū)略多。長(zhǎng)蛸為沿岸底棲頭足類，

13、是肉食性動(dòng)物，主要以小型蟹類、貝類為食，長(zhǎng)蛸個(gè)體大、肉質(zhì)肥厚鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，富含蛋白質(zhì)和氨基酸，可食用部分占總體的90%以上。肉除鮮食外，還可以加工成干制品，食用方式多種多樣。其內(nèi)骨骼(中藥名海螵蛸)和墨囊具有較高的藥用價(jià)值，有止血、抗癌等功效，因而長(zhǎng)蛸具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近幾年，隨著大量出口日本、韓國(guó)，市場(chǎng)供不應(yīng)求現(xiàn)象嚴(yán)重，經(jīng)濟(jì)價(jià)值不斷攀升，已成為北方重要經(jīng)濟(jì)頭足類。同時(shí)，黃渤海捕撈力度加大造成了自然資源嚴(yán)重衰退。國(guó)內(nèi)關(guān)于長(zhǎng)蛸形態(tài)、生

14、態(tài)分布、組織學(xué)與組織化學(xué)的研究已見(jiàn)報(bào)道，關(guān)于種質(zhì)資源遺傳多樣性方面的研究很少報(bào)道，而生物群體的遺傳多樣性是評(píng)價(jià)生物資源狀況的一個(gè)重要依據(jù)，是物種適應(yīng)多變的環(huán)境條件、維持長(zhǎng)期生存和進(jìn)化的遺傳基礎(chǔ)，對(duì)種群內(nèi)和種群間遺傳多樣性的認(rèn)識(shí)在進(jìn)行種質(zhì)鑒定和親本選擇時(shí)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義，所以進(jìn)行長(zhǎng)蛸遺傳多樣性的研究具有重要的意義[2]。</p><p>　　ISSR(inter-simple sequence repeat)技術(shù)

15、作為一種新型的分子遺傳標(biāo)記，是Zietkeiwitcz等于1994年發(fā)展起來(lái)的一種微衛(wèi)星基礎(chǔ)上的分子標(biāo)記[3-4]。其基本原理是：用錨定的微衛(wèi)星DNA為引物，即在SSR序列的3'端或5'端加上2-4個(gè)隨機(jī)核苷酸，在PCR反應(yīng)中，錨定引物可引起特定位點(diǎn)退火，導(dǎo)致與錨定引物互補(bǔ)的間隔不太大的重復(fù)序列間DNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增[5-7]。所擴(kuò)增的inter SSR區(qū)域的多個(gè)條帶通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳或者瓊脂糖凝膠電泳得以分辨，

16、擴(kuò)增譜帶多為顯性表現(xiàn)。ISSR引物的開(kāi)發(fā)不像SSR引物那樣需測(cè)序獲得SSR兩側(cè)的單拷貝序列，開(kāi)發(fā)費(fèi)用降低。與SSR標(biāo)記相比，ISSR引物可以在不同的物種間通用，不像SSR標(biāo)記一樣具有較強(qiáng)的種特異性；與RAPD和RFLP相比，ISSR揭示的多態(tài)性較高，可獲得幾倍于RAPD的信息量，精確度幾乎可與RFLP相媲美，檢測(cè)非常方便，因而是一種非常有發(fā)展前途的分子標(biāo)記。目前，ISSR標(biāo)記已廣泛應(yīng)用于植物品種鑒定、遺傳作圖、基因定位、遺傳多樣性、進(jìn)化

17、及分子生態(tài)學(xué)研究中[8.9.10]，而在動(dòng)物品種研究方面應(yīng)用很少</p><p><b>　　材料與方法</b></p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)材料</b></p><p>　　試驗(yàn)所用的的長(zhǎng)蛸分別采自舟山(ZS)、溫州(WZ)地區(qū)。取活體長(zhǎng)蛸的肌肉組織為材料，于-20℃無(wú)水乙醇中保存?zhèn)溆?。每個(gè)群體取樣100個(gè)進(jìn)行DNA

18、 提取。</p><p>　　ISSR引物：根據(jù)加拿大British Columbia大學(xué)設(shè)計(jì)的ISSR引物序列合成7條引物。</p><p>　　其它材料：Taq酶 ，10×PCR 緩沖液，MgCl2：25mmol/L，dNTP：2.5mmol/L，無(wú)水乙醇，STE，SDS，PK，平衡酚，氯仿，異戊醇，NaCL溶液（5moL/L），瓊脂糖，去離子水，Load

19、ing-buffer等。</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)儀器</b></p><p>　　PCR儀為：BIO-RAD生產(chǎn)的PTC-200型PCR儀；</p><p>　　凝膠成像系統(tǒng)為：BIO-RAD生產(chǎn)的VH II型凝膠成像系統(tǒng)； </p><p>　　冷凍離心機(jī)為：上海金鵬分析儀器有限公司生產(chǎn)的GL-16G-II型

20、冷凍離心機(jī)；</p><p>　　高壓蒸汽滅菌鍋為：上海博訊實(shí)業(yè)有限公司的YXQ-LS-OS11型立式高壓蒸汽滅菌鍋；</p><p>　　電泳儀：北京六一儀器廠生產(chǎn)的DYY-8C型水平電泳儀；</p><p>　　電子天平為：METTLER-TOLEDO生產(chǎn)的EL104型電子天平；</p><p>　　水浴鍋：常州國(guó)華電器有限公司生產(chǎn)的HH

21、-6型數(shù)顯水浴鍋；</p><p>　　移液器：北京青云卓立精密設(shè)備有限公司。</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p>　　長(zhǎng)蛸基因組DNA的提取</p><p>　　長(zhǎng)蛸DNA提取的步驟：</p><p>　?。?）剪取小塊的樣品組織放入離心管。</p>&l

22、t;p>　?。?）加600μl的STE+60μl的SDS(10%)，剪碎后加6μl的PK。</p><p>　?。?）55℃水溶消化3-3.5h，至溶液澄清，無(wú)沉淀（其中前半個(gè)小時(shí)消化時(shí)，每5min搖一次，使溶液充分混合，充分消化）。</p><p>　?。?）加入330μl二相混合（氯仿：異戊醇=24:1）+330μl （等體積）平衡酚，緩慢搖晃15min,使之充分混合。</

23、p><p>　?。?）放入離心機(jī)，低溫12000轉(zhuǎn)，離心15min。</p><p>　?。?）取上清至新的離心管重復(fù)4，5步驟兩次（等體積2相+1相混合）。</p><p>　?。?）加入等體積的二相（氯仿：異戊醇=24:1）充分，緩慢搖晃15 min,12000轉(zhuǎn)離心15 min。</p><p>　?。?）取上清加入新的離心管中，加入1/2

24、5體積的NacL溶液（5mol/L）和2.5倍體積無(wú)水乙醇（-20℃下靜置后再用），充分混勻（搖15 min），-20℃下靜置1h后離心15 min。</p><p>　?。?）去上清，留沉淀，加入70%酒精（-20℃）搖晃幾次，靜置7-8min，12000轉(zhuǎn)，離心8min。重復(fù)第九步一次，去上清，留沉淀，使酒精揮發(fā)干，加入100μl去離子水，-4℃保存。</p><p>　　檢測(cè)長(zhǎng)蛸基因

25、組DNA</p><p>　　取一錐形瓶，稱取1g的瓊脂糖倒入其中，加入100ml的0.5×TBE。放入微波爐中加熱，倒平板，等待膠冷卻成型后，放入電泳槽中，按順序?qū)oading buffer和DNA的混合物點(diǎn)入膠孔中，電泳30 min后，放入溴化乙錠溶液中染色20min，然后在凝膠成像系統(tǒng)中觀察結(jié)果并拍照。</p><p>　　長(zhǎng)蛸ISSR-PCR </p>&

26、lt;p>　　根據(jù)加拿大哥倫比亞大學(xué)公布的序列，由上海生物英俊生物工程技術(shù)服務(wù)右鍵公司合成。經(jīng)優(yōu)化的PCR反應(yīng)體系為：25μl總體積中包括1 x PCR緩沖液、2.5mmol/L的Mg2+、0.25mmol/L的dNTP、0.5μmol/L的ISSR引物、1U的Taq DNA聚合酶、40ng模板DNA。PCR反應(yīng)程序?yàn)?4℃變性40s，52℃退火40s，72℃延伸90s，38個(gè)循環(huán)后,72℃延伸7min；4℃保存。利用優(yōu)化的ISS

27、R-PCR體系，對(duì)合成的100條引物進(jìn)行篩選。用篩選出的特異性好，重復(fù)性高的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以100-2000bp的DNA標(biāo)準(zhǔn)分子量為參照，擴(kuò)增產(chǎn)物在1X TBE緩沖液、電壓100V的電泳條件下，用1.5%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離，電泳后再凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照。</p><p><b>　　長(zhǎng)蛸數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析</b></p><p>　　ISSR為顯性標(biāo)記，由同

28、一引物擴(kuò)增的電泳遷移率一致的條帶作為同一位點(diǎn)，記錄清晰穩(wěn)定的電泳條帶，按條帶的有無(wú)分別記為“1”和“0”，構(gòu)成ISSR表型數(shù)據(jù)矩陣。用POPGENE(Version 1.32)軟件[15]計(jì)算一下遺傳參數(shù)：多態(tài)位點(diǎn)比例、觀測(cè)等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、Nei’s基因多樣性指數(shù)、Shannon’s信息指數(shù)、居群間的遺傳分化系數(shù)和基因流、遺傳相似度和Nei’s遺傳距離。以DCFA(verison1.1)軟件[16]技術(shù)歐氏距離平方，利用WI

29、NAMOVA(version1.55)軟件對(duì)居群間和據(jù)群內(nèi)的遺傳變異進(jìn)行分子變異分析(Analysis of molecular caricnce,AMOVA)[17]?；贜ei’s遺傳距離，用MEGA(version 4.0)軟件[18]中的鄰接法(Neighbor-joining NJ),分別對(duì)2個(gè)居群以及這些居群中的100只個(gè)體進(jìn)行聚類分析。</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析</

30、b></p><p>　　不同居群的遺傳多樣性</p><p>　　對(duì)長(zhǎng)蛸2個(gè)居群的樣品進(jìn)行擴(kuò)增的結(jié)果顯示，擴(kuò)增產(chǎn)物的分子量大多在100-2000 bp之間，利用7個(gè)ISSR引物共擴(kuò)增出118個(gè)位點(diǎn)，平均每個(gè)引物記錄16.8個(gè)位點(diǎn)。長(zhǎng)蛸2個(gè)居群的多態(tài)位點(diǎn)比例、觀測(cè)等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、Nei’s基因多樣性指數(shù)和Shannon’s 信息指數(shù)(表2)。從表2可見(jiàn)，舟山居群的多態(tài)位點(diǎn)

31、比例明顯高于溫州。結(jié)合Nei’s基因多樣性指數(shù)(h)和Shannon’s信息指數(shù)(I)來(lái)看，舟山居群的遺傳多樣性水平較高，溫州居群的長(zhǎng)蛸遺傳多樣性相對(duì)較低。方差分析的結(jié)果表明，基因多樣性指數(shù)和Shannon’s信息指數(shù)在2個(gè)居群之間存在顯著差異。</p><p>　　長(zhǎng)蛸在居群水平上，平均每個(gè)位點(diǎn)的有效等位基因數(shù)Ne=1.2735，Nei’s基因多樣性指(h)和Shannon’s信息指數(shù)(I)分別為0.1571和

32、0.2335；在物種水平上，Ne=1.5317，h和I值分別為0.3145和0.4766?？傮w而言，長(zhǎng)蛸仍具有較高的遺傳多樣性水平。 </p><p>　　圖2 引物UBC834對(duì)長(zhǎng)蛸舟山群體的擴(kuò)增圖譜</p><p>　　Fig.2　The amplification patterns of primer UBC834 in Zhoushan population</p

33、><p>　　表1　篩選引物序列和擴(kuò)增結(jié)果</p><p>　　Tab.1　The sequence of primers elected and amplification results</p><p>　　引物 序列(5′—3′) 總位點(diǎn)數(shù) 多態(tài)位點(diǎn)數(shù) 多態(tài)位點(diǎn)比例(%)</p>&l

34、t;p>　　Primer Sequence Total loci Polymorphic loci Ratios of polymorphic loci</p><p>　　UBC 834 AGA GAG AGA GAG AGA GYT 19 9 47.37</p><

35、;p>　　UBC 836 AGA GAG AGA GAG AGA GYA 18 10 55.56</p><p>　　UBC 840 GAG AGA GAG AGA GAG AYT 16 8 50.00</p><p>　　UBC 84

36、1 GAG AGA GAG AGA GAG AYC 18 8 44.44</p><p>　　UBC 845 CTC TCT CTC TCT CTC TRG 18 7 38.89</p><p>　　UBC 849 GTG TGT

37、GTG TGT GTG TYA 13 6 46.15</p><p>　　UBC 851 GTG TGT GTG TGT GTG TYG 16 7 43.75 </p><p>　　表2 兩個(gè)個(gè)長(zhǎng)蛸群體的遺

38、傳多樣性結(jié)果</p><p>　　Tab.2　Results of genetic diversity of two populations</p><p>　　群體 多態(tài)位點(diǎn)比例(%) 觀測(cè)等位基因數(shù) 有效等位基因數(shù) Nei’s基因多樣性指數(shù) Shannon信息指數(shù)</p><p>　　Population

39、 Percentage of polymorphic loci Observed number of alleles Effective number ofalleles Nei’s gene diversity(h) Shannon’s information index(I)</p><p>　　舟山 46.61 1.4661±0.5010 1.2864&

40、#177;0.3800 0.1633±0.2044 0.2417±0.2916 </p><p>　　溫州 44.07 1.4407±0.4986 1.2606±0.3633 0.1510±0.1971 0.2253±0.2830</p><p>

41、<b>　　遺傳變異與分化</b></p><p>　　通過(guò)AMOVA的等級(jí)剖分法計(jì)算出去居群間和居群內(nèi)對(duì)總遺傳變異的貢獻(xiàn)率表明，長(zhǎng)蛸54.6%的變異發(fā)生在居群間，45.4%的變異發(fā)生在居群內(nèi)(表3)，顯示長(zhǎng)蛸群體的遺傳變異主要來(lái)自居群間，但據(jù)群內(nèi)的變異也處于較高水平</p><p>　　表3 長(zhǎng)蛸2個(gè)群體遺傳變異的AMOVA分析</p><p&g

42、t;　　Tab.3 Analysis of molecular variance(AMOVA)of Octopus variabilis seven populations</p><p>　　變異來(lái)源 自由度 離差平方和 變異組分 變異百分率 P* </p><p>　　Source of variance Degre

43、e of free- Sum of square Variance Percentage of</p><p>　　dom deviation component variation(%)</p><p>　　居群間1258.708 10.39213 52.78079 ＜0.001</p><p&

44、gt;　　Among populations</p><p><b>　　居群內(nèi)</b></p><p>　　Within populations 47 427.667 9.29710 47.21921 ＜0.001</p><p>　　注：*交換1000次單倍型的顯著性檢驗(yàn)

45、</p><p>　　Note:*Significant differences were calculated using 1000 permuted samples</p><p><b>　　討論</b></p><p><b>　　長(zhǎng)蛸的遺傳多樣性</b></p><p>　　不同物種對(duì)IS

46、SR的反應(yīng)條件是有差別的，要把ISSR技術(shù)應(yīng)用到長(zhǎng)蛸上，就必須探索長(zhǎng)蛸的最適ISSR反應(yīng)條件。研究結(jié)果證明，采用不同的反應(yīng)體系會(huì)對(duì)ISSR擴(kuò)增產(chǎn)生較大的影響，從而影響ISSR分析的準(zhǔn)確性，而ISSR帶譜的準(zhǔn)確性與穩(wěn)定性是進(jìn)行遺傳多樣性分析的前提條件。要利用這一新型分子標(biāo)記對(duì)長(zhǎng)蛸進(jìn)行遺傳多樣性分析，獲得重復(fù)性和可靠性較高的ISSR帶譜，就必要對(duì)其影響因子進(jìn)行篩選和優(yōu)化。采用所確定的ISSR- PCR反應(yīng)體系對(duì)長(zhǎng)蛸進(jìn)行基因組擴(kuò)增，能獲得清晰

47、、穩(wěn)定、DNA多態(tài)性高的基因圖譜，表明已確立的ISSR-PCR反應(yīng)體系穩(wěn)定可靠，為進(jìn)一步利用ISSR標(biāo)記研究長(zhǎng)蛸種質(zhì)資源的遺傳多樣性奠定了基礎(chǔ)。</p><p>　　Nei’s基因多樣性指數(shù)(h)和Shannon’s信息指數(shù)(I)是衡量物種遺傳多樣性的重要參數(shù)[19]。利用ISSR方法得到的集中海洋軟體動(dòng)物在物種水平上的h和I值：大珠母貝(Pinctada maxima)分別為0.2832和0.4372[10]，

48、四角蛤蜊(Neverita veneriformis)分別為0.3070和0.4760[7]，扁玉螺(Neverita didyma)分別為0.3395和0.5113[11]。于本文得到的長(zhǎng)蛸物種水平上的h和I值分別為0.1571和0.2335相比，長(zhǎng)蛸的遺傳多樣性水平低于四角蛤蜊，扁玉螺和大珠母貝，在種的水平上仍具有較高的遺傳多樣性；而在居群水平上的遺傳多樣性相對(duì)較低，并且不同居群的遺傳多樣性存在明顯差異。從群體遺傳學(xué)角度來(lái)說(shuō)，物種的

49、遺傳多樣性水平與其適應(yīng)能力，繁殖能力和進(jìn)化潛力密切相關(guān)，遺傳多樣性水平的降低往往會(huì)導(dǎo)致生物對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力減弱、種質(zhì)衰退等[21]。研究遺傳多樣性的目的，就是為了最大限度地保持種內(nèi)的遺傳多樣性水平，維持物種進(jìn)化潛力以確保種質(zhì)資源的可持續(xù)利用。由于各種人為因素對(duì)長(zhǎng)蛸棲息環(huán)境的不利影響和對(duì)長(zhǎng)蛸的過(guò)度捕撈，已對(duì)長(zhǎng)蛸</p><p><b>　　小結(jié)</b></p><p>

50、　　海洋中蘊(yùn)含著豐富的寶貴資源，海洋生物是人們開(kāi)發(fā)海洋“藍(lán)色農(nóng)業(yè)”的主體，隨著人們對(duì)海洋生物資源的深度發(fā)掘，單純依靠海洋捕撈已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人們的需求。因此，海水養(yǎng)殖業(yè)正以前所未有的驚人速度蓬勃發(fā)展。開(kāi)發(fā)、利用資源的同時(shí)，我們不能忘記對(duì)其保護(hù)。長(zhǎng)蛸是具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值的物種，目前其人工繁殖技術(shù)已經(jīng)突破，但其遺傳多樣性方面的研究還是空白，本研究為將新型的分子標(biāo)記ISSR引用到該品種遺傳多樣性分析上來(lái)奠定了基礎(chǔ)?；蚪MDNA 的提取是基因分

51、析的基礎(chǔ)，任何基于PCR 的分子標(biāo)記技術(shù)都離不開(kāi)這一步驟，因此，基因組DNA的提取結(jié)果直接影響基因分析的結(jié)果。從群里遺傳學(xué)角度來(lái)說(shuō)，物種的遺傳多樣性水平與其適應(yīng)能力，繁殖能力和進(jìn)化潛力密切相關(guān)，遺傳多樣性水平的降低往往會(huì)導(dǎo)致生物對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力減弱、種質(zhì)衰退等。研究遺傳多樣性的目的，就是為了最大限度地保持種內(nèi)的遺傳多樣性水平，維持物種進(jìn)化潛力以確保種質(zhì)資源的可持續(xù)利用。由于各種人為因素對(duì)長(zhǎng)蛸棲息環(huán)境的不利影響和對(duì)長(zhǎng)蛸的過(guò)度捕撈，已對(duì)長(zhǎng)蛸

52、種質(zhì)資源產(chǎn)生了嚴(yán)重的威脅，因此應(yīng)采取建立種質(zhì)保護(hù)區(qū)等必要的措施。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　柳學(xué)周，莊志猛，馬愛(ài)軍等.半滑舌鰨繁殖生物學(xué)及繁育技術(shù)研究[J].海洋水產(chǎn)研究，2005 , 26 (5) : 7 - 14.</p><p>　　錢韋，葛頌，洪德元。采用RAPD和ISSR標(biāo)記探討中國(guó)疣粒野生稻的

53、遺傳多樣性[J ].植物學(xué)報(bào),2000 ,42(7) : 741 - 750.</p><p>　　Zietkiewicz E, Rafalski A, Labuda D. Genome fingerprinting by sim2ple sequence repeat (SSR) - anchored polymerase chain reaction amplification [J]. Genomics,

54、1994, 20: 176 – 1831.</p><p>　　Gupta M, Chyi YS , Romero - Severson J , Owen J L. Amplification of DNA markers from evolutionarily diverse genomes using single primers of simple - sequence repeats [J ]. Theo

55、r Appl Genet , 1994 ,89 : 998 – 1006.</p><p>　　Godwin I D , Aiken E A B, Smith L W. Application of inter simple sequence repeat ( ISSR) markers to plant genetics [J]. Electrophoresis, 1997 , 18 : 1524 – 1528

56、.</p><p>　　Ali S , Müller C R , Epplen J T. DNA fingerprinting by oligonucleotide probes specific for simple repeats [J]. Hum Genet , 1986 ,74 : 239 – 243.</p><p>　　呂林蘭，王愛(ài)民，杜曉東等.馬氏珠母貝DNA 快速

57、一步法(ROSE)提取及ISSR - PCR 應(yīng)用[J ].海洋科學(xué), 2003 , 27 (10) : 42 - 45.</p><p>　　趙淑清， 武維華。DNA 分子標(biāo)記和基因定位[J].生物技術(shù)通報(bào)，2000 , 6 : 1 – 4</p><p>　　鄒喻蘋(píng)， 葛頌，王曉東。系統(tǒng)與進(jìn)化植物學(xué)中的分子標(biāo)記[M].北京: 科學(xué)出版社, 2001.</p><p&

58、gt;　　李孟華，王海生，趙書(shū)紅。DNA 分子標(biāo)記在動(dòng)物個(gè)體識(shí)別與親權(quán)鑒定方面的應(yīng)用[J].生物技術(shù)通報(bào)， 2001 , 5 : 4 – 71.</p><p>　　肖波，李巖，屈慧歌，等.兩種動(dòng)物基因組DNA 提取方法的比較[J].煙臺(tái)師范學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2005 , 21(1) :56 – 58.</p><p>　　Wu K S , Jones R , Danneberger

59、L , Scolnik P A. Detection of mi2crosatellite polymorphisms without cloning [J ]. Nucleic Acids Res ,1994 , 22 : 3257 – 3258.</p><p>　　Sánchez de la HozM P , Dávila J A , Loarce Y, Ferrer E. Simple

60、 se2quence repeat primers used in polymerase chain reaction amplifica2tions to study genetic diversity in barley [J]. Genome , 1996 , 39 :112 – 117.</p><p>　　Becker J, Heun M. Mapping of digested and undiges

61、ted random am2plified microsatellite polymorphisms in barley [J]. Genome , 1995 ,38 : 991 – 998.</p><p>　　Y Yeh F C,Boyle T J B.Population genetic analysis of co-dominant and dominant markers and quantit

62、ative[J].Belgion Journal of Botany,1997,129(2):157.</p><p>　　Zhang F M, Ge S. Data analysis in population genetics analysis of RAPD data with AMOVA[J]. Biodiversity science,2002,10(4);438-444.</p>&l

63、t;p>　　張富民，葛頌。群體遺傳學(xué)研究中的數(shù)據(jù)處理方法。.PAPD數(shù)據(jù)的AMOVA分析。生物多樣性，2002,10(4):438-444.</p><p>　　Excoffier L, Smouse P E, Quattro J M. Analysis of molecular variance interred from metric distances among DNA haplotypes: Ap

64、plication to human mitochondrial DNA restriction data [J]. Genetics,1992,131(2):479-491.</p><p>　　Tamura K, Dudley J, Nei M, Kumar S, MEGA4: molecular evolutionary genetics analysis (MEGA) software cersion 4