實驗動物

1、實驗動物,B-626講解人：肖亮星同組人員 ：徐戴安 眭艷明 胡發(fā)彬 董博文 沈金炅 董博文 肖亮星,第四節(jié) 實驗動物檢驗標本的采集,尿液的采集 腦脊液的采集 胸水的采集 腹水的采集,一 尿液的采集,常用的采集方法較多，一般在實驗前需給動物灌服一定量的水。,(一)代謝籠法,此法較常用，適用于大、小鼠。將動物放在特制的籠內(nèi)。動物排便時，可以通過籠子底部的大小便分離漏斗將尿液與糞便分開，達到采集尿液的目的。由于大、小

2、鼠尿量較少，操作中的損失和蒸發(fā)，各鼠膀胱排空不一致等原因，都可造成較大的誤差，因此一般需收集5小時以上的尿液，最后取平均。,(二)導尿法,常用于雄性兔、狗。動物輕度麻醉后，固定于手術臺上。由尿道插入導尿管(頂端應用液體石蠟涂抹)，可以采到?jīng)]有受到污染的尿液。,(三)壓迫膀胱法,在實驗研究中，有時為了某種實驗目的，要求間隔一定的時間，收集一次尿液，以觀察藥物的排泄情況。動物輕度麻醉后，實驗人員用手在動物下腹部加壓，手要輕柔而有力。當加的壓

3、力足以使動物膀胱括約肌松馳時，尿液會自動由尿道排出。此法適用于兔、狗等較大動物。,(四)輸尿管插管法,動物麻醉后，固定于手術臺上。剪毛、消毒，于恥骨聯(lián)合上緣之上在正中線做皮膚切口(長約3～4cm),沿腹中線切開腹壁及腹膜,找到膀胱翻出腹外。辨認清楚輸尿管進入膀胱背側(cè)的部位(膀胱三角)后，細心地分離出兩側(cè)輸尿管，分別在*近膀胱處穿線結(jié)扎。在離此結(jié)扎點約2cm 處的輸尿管近腎段下方穿一根絲線。用眼科剪在管壁上剪一斜向腎側(cè)的小切口，分別插入充

4、滿生理鹽水的細塑料管( 插入端剪成斜面)，用留置的線結(jié)扎固定?？梢姷侥虻螐牟骞苤辛鞒? 頭幾滴是生理鹽水)，塑料管的另一端與帶刻度的容器相連或接在記滴器上， 以便記錄尿量。 在適用過程中應經(jīng)常活動一下輸尿管插管，以防阻塞。在切口和膀胱處應蓋上溫濕的生理鹽水紗布。,(五)膀胱插管法,腹部手術同輸尿管插管。將膀胱翻出腹外后，用絲線結(jié)扎膀胱頸部，阻斷它同尿道的通路。然后在膀胱頂部避開血管剪一小口，插入膀胱漏斗，用絲線做以荷包縫合固定。漏斗最好

5、正對著輸尿管的入口處。注意不要緊貼膀胱后壁而堵塞輸尿管。下端接橡皮管插入帶刻度的容器內(nèi)以收集尿液。,(六)穿刺膀胱法,動物麻醉后固定于手術臺上，在恥骨聯(lián)合之上腹正中線剪毛，消毒后進行穿刺，入皮后針頭應稍改變一下角度，以避免穿刺后漏尿。,(七)剖腹采尿法,同穿刺法做術前準備，皮膚準備范圍應大一點。剖腹暴露膀胱，操作者的左手用無齒小平鑷夾住一小部分膀胱，右手持針在小鑷夾住的膀胱部位直視穿刺抽取尿液。可避免針頭貼在膀胱壁上而抽不出尿液。,(八

6、)反射排尿法,適用于小鼠，因小鼠被人抓住尾巴提起時排便反射比較明顯。故需采取少量尿液時，可提起小鼠，將排出的尿液接到帶刻度的容器內(nèi)。,二、腦脊液的采集,麻醉犬，讓犬處于側(cè)俯臥位，使其頭與尾盡量向腹中彎曲，用剪毛剪將第七腰椎周圍被毛剪去，用3％碘酊和75％酒精嚴格消毒后，在犬背部客骨連線中點稍向下方摸到第七腰椎間隙（第七腰椎與第一薦骨之間）插入腰椎穿刺針頭，當針達到管內(nèi)時（蛛網(wǎng)膜下腔）可見到犬后肢有抽動，即證明穿刺針頭已進入椎管。此時不要

7、再向下刺，以免損傷脊髓。然后抽出穿刺針芯，可見透明的腦脊髓液慢慢滴出。犬一次抽2～3ml，但抽好后，注入同樣量的生理鹽水，以保持原來腦脊椎里的壓力。,,,(一)狗、兔腦脊液的采集通常采取脊髓穿刺法    穿刺部位在兩髂連線中點稍下方第七腰椎間隙。動物輕度麻醉后，側(cè)臥位固定，使頭部及尾部向腰部盡量彎曲，剪去第七腰椎周圍的被毛。消毒后操作者在動物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮膚，右手持腰穿刺針垂直刺入，當

8、有落空感及動物的后肢跳動時，表明針已達椎管內(nèi)( 蛛網(wǎng)膜下腔)，抽去針芯,即見腦脊液流出。如果無腦脊液流出，可能是沒有刺破蛛網(wǎng)膜。輕輕調(diào)節(jié)進針方向及角度，如果腦脊液流的太快，插入針芯稍加阻塞，以免導致顱內(nèi)壓突然下降而形成腦疝。,,(二)大鼠腦脊液的采集可采用枕大孔直接穿刺法 在大鼠麻醉后，頭部固定于定向儀上。頭頸部剪毛、消毒，用手術刀沿縱軸切一縱行切口(約2cm）用剪刀鈍性分離頸部背側(cè)肌肉。為避免出血，最深層附著在骨

9、上的肌肉用手術刀背刮開，暴露出枕骨大孔。由枕骨大孔進針直接抽取腦脊液。抽取完畢逢好外層肌肉、皮膚。刀口處可撒些磺胺藥粉，防止感染。采完腦脊液后，應注入等量的消毒生理鹽水，以保持原來腦脊髓腔的壓力。,三、胸水的采集,主要采用胸腔穿刺法收集實驗動物的胸水，也可處死實驗動物剖開胸腔采集胸水。,,穿刺點定位： 于實驗動物脊側(cè)腋后線第11～12肋間隙穿刺，穿刺針緊貼肋骨上緣，否則容易損傷肋間神經(jīng)。此部位是肺最下界之外側(cè)，既可避免損傷肺組織造成氣

10、胸，又易采集在隔肋竇的胸水。此外，也可在腹側(cè)胸壁近胸骨左側(cè)緣第4～5肋間隙穿刺。,,穿刺方法： 實驗動物取立位或半臥位固定，局部皮膚去毛、消毒、麻醉，穿刺針頭與注射器之間接三通連接裝置，實驗人員以左手拇指、食指繃緊局部皮膚，右手握穿刺針緊*肋骨下緣處垂直進針，穿刺肋間肌時產(chǎn)生一定阻力，當阻力消失有落空感時，說明已刺入胸膜腔，用左手固定穿刺針，打開三通連接裝置，緩慢抽取胸水。,,,注意：,操作中嚴防空氣進入胸腔，始終保持胸腔負壓。穿刺應

11、用手控制針頭的深度，以防穿刺過深刺傷肺臟。,四、腹水的采集,抽取狗等大動物腹水，讓狗按自然站立位固定，穿刺部位在恥骨前緣與臍之間，腹中線兩側(cè)。剪毛消毒，局部浸潤麻醉。操作者左手拇指、食指緊繃穿刺部位的皮膚，右手控制穿刺深度做垂直穿刺。注意不可刺的太深，以免刺傷內(nèi)臟。穿刺針進入腹腔后，腹水多時可見因腹壓高而自動流出。腹水太少可輕輕回抽，并同時稍稍轉(zhuǎn)動一下針頭，一旦有腹水流出，立即固定好針頭及注射器的位置連續(xù)抽取。 抽取大鼠、