pmn分離qq

1、因?yàn)榇笫蠹t細(xì)胞比重是1。090，中性粒細(xì)胞的比重是1。0911取9份percoll原液與1份1.5m的Nacl混合定為100%的工作液然后就是目的液的配置根據(jù)你的鼠的密度取一定量的100%的工作液和一定量的生理鹽水充分混合后即為目的液比如：目的密度1.084=（1.126781.9121.0091.088）31.12678為100%的工作液的密度1.912為100%的工作液的體積1.009為生理鹽水的密度1.088為生理鹽水的體積3為總

2、體積1.5m的Nacl是我自己配的條件是1400rpmmin，20min還是全血與PBS1：1混合后再加在工作液上？配好目的液后把1:1稀釋血小心加在目的液上分兩步：第一部是配工作液用PBS稀釋?zhuān)康诙渴怯霉ぷ饕号淠康囊弘x心完后取第三層（中性粒細(xì)胞層）第四層（紅細(xì)胞層），再裂解你裂解液用的是什么？讓后用二蒸水裂解的也可以用氯化銨哦，明白了，1.084是牛的淋巴細(xì)胞比重差不多這個(gè)密度能除去90多的淋巴細(xì)胞雙蒸水裂解的條件你告我一下一般1m

3、l的紅細(xì)胞沉淀加2.5ml左右的雙蒸水裂解30s左右再直接放上足夠PBS把雙蒸水稀釋?zhuān)x心，是吧加到工作液上后細(xì)胞分層也是第一層：血漿層、第二層淋巴層、第三層PMN層、第四層紅細(xì)胞層吧取第三層、第四層裂解如果第三層里的細(xì)胞PMN較多而且純度較高那就不用再取第四層了而且我個(gè)人認(rèn)為紅細(xì)胞和PMN有可能不能完全分開(kāi)BonemarrowPMN(BMPMN)wereisolatedaccdingtotheproceduredescribedinr

4、eference37withsomemodifications.BrieflyBMCsuspendedin2mlofKRG()werelaidontopofathreelayerPercollgradientpreparedin15mlpolystyrenetubingbylayering2mleachof1.0951.0851.070gmlPercollsolutions.ThedensityofeachPercollsolution

5、wasverifiedusingdensitymarkerbeads.Aftercentrifugationat500gf30minat4Cinaswingingbucketrotthelowestb(1.0851.095gmlinterface)theupperpartofthe1.095gmllayerwerecollectedasthePMNfraction.AfterwashingwithKRG()remainingredblo