大鼠熱休克蛋白70hsp-70酶聯(lián)免疫分析elisa

1、1大鼠熱休克蛋白大鼠熱休克蛋白70(HSP70)70(HSP70)酶聯(lián)免疫分析（酶聯(lián)免疫分析（ELISAELISA）試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中熱休克蛋白熱休克蛋白70(HSP70)70(HSP70)的含量。試劑盒性能：試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和11%檢測范圍：檢測范圍：請來電咨詢請來電咨詢保存條件及有效期：保存條件

2、及有效期：1.試劑盒保存：；28℃。2有效期：6個月注意事項：注意事項：1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含

3、量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。實驗原理：實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠熱休克蛋白

4、大鼠熱休克蛋白70(HSP70)水平。用純化的大鼠熱休克蛋白鼠熱休克蛋白70(HSP70)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入熱休克蛋白熱休克蛋白70(HSP70)，再與HRP標記的熱休克蛋白熱休克蛋白70(HSP70)抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的熱休克蛋白熱休克蛋白70(HSP70)呈正

5、相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠大鼠熱休克蛋白熱休克蛋白70(HSP70)濃度。樣本處理及要求樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固1020分鐘，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合1020分鐘后，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉

6、淀形成，應該再次3動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15

7、分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。計算：計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際