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文檔簡介
1、1大鼠熱休克蛋白90(HSP90)酶聯(lián)免疫分析(酶聯(lián)免疫分析(ELISAELISA)試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關液體樣本中熱休克蛋白90(HSP90)的含量。實驗原理:實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠熱休克蛋白90(HSP90)水平。用純化的大鼠熱休克蛋白90(HSP90)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入熱休克蛋白90(HSP90),
2、再與HRP標記的熱休克蛋白90(HSP90)抗體結合,形成抗體抗原酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的熱休克蛋白90(HSP90)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠熱休克蛋白90(HSP90)濃度。試劑盒組成試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片
3、(96)密封袋1個1個酶標包被板14819628℃保存標準品:2700ngL0.5ml1瓶0.5ml1瓶28℃保存標準品稀釋液1.5ml1瓶1.5ml1瓶28℃保存酶標試劑3ml1瓶6ml1瓶28℃保存樣品稀釋液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存顯色劑A液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存顯色劑B液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存終止液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存濃縮洗滌液(20ml20倍)1瓶(20ml30倍)1瓶28℃保存樣本處理及要求樣本
4、處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固1020分鐘,離心20分鐘左右(20003000轉(zhuǎn)分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合1020分鐘后,離心20分鐘左右(20003000轉(zhuǎn)分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(20003000轉(zhuǎn)分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、
5、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(20003間最好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(n5)。5封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必
6、須以酶標儀讀數(shù)為準.8所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算:計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。試劑盒性能:試劑盒性能:1.樣
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