測定α-淀粉酶活力的方法

1、實驗五實驗五激活劑、抑制劑、溫度及激活劑、抑制劑、溫度及PH對酶活性的影響對酶活性的影響一、目的要求通過實驗加深對酶性質的認識，了解測定α淀粉酶活力的方法。二、實驗原理酶是生物體內具有催化作用的蛋白質，通常稱為生物催化劑。酶催化的反應稱為酶促反應。生物催化劑催化生化反應時具有：催化效率好、有高度的專一性、反應條件溫和、催化活力與輔基，輔酶，金屬離子有關等特點。能提高酶活力的物質，稱為激活劑。激活劑對酶的作用有一定的選擇性，其種類多為無機

2、離子和簡單的有機化合物。使酶的活力中心的化學性質發(fā)生變化，導致酶的催化作用受抑制或喪失的物質稱為酶抑制劑。氯離子為唾液淀粉酶的激活劑，銅離子為其抑制劑。應注意的是激活劑和抑制劑不是絕對的，有些物質在低濃度時為某種酶的激活劑，而在高濃度時則為該酶的抑制劑。如氯化鈉達到約30%濃度時可抑制唾液淀粉酶的活性。酶促反應中，反應速度達到最大值時的溫度和PH值稱為某種酶作用時的最適溫度和PH值。溫度對酶反應的影響是雙重的：一方面隨著溫度的增加，反應

3、速度也增加，直至最大反應速度為止；另一方面隨著溫度的不斷升高，而使酶逐步變性從而使反應速度降低。同樣，反應中某一PH范圍內酶活力可達最高，在最適PH的兩側活性驟然下降，其變化趨勢呈鐘形曲線變化。食品級α淀粉酶是一種由微生物發(fā)酵生產而制備的微生物酶制劑，主要由枯草芽孢桿菌、黑曲霉、米曲霉等微生物產生。但不同菌株產生的酶在耐熱性、酶促反應的最適溫度、PH、對淀粉的水解程度，以及產物的性質等均有差異。α淀粉酶屬水解酶，作為生物催化劑可隨機作用

4、于直鏈淀粉分子內部的α14糖苷鍵，迅速地將直鏈淀粉分子切割為短鏈的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉與碘的反應逐漸消失，這種作用稱為液化作用，生產上又稱α淀粉酶為液化淀粉酶。α淀粉酶不能水解淀粉支鏈的α16糖苷鍵，因此最終水解產物是麥芽糖、葡萄糖和α16鍵的寡糖。本實驗通過淀粉遇碘顯藍色，糊精按其分子量的大小遇碘顯紫藍、紫紅、紅棕色，較小的糊精（少于6個葡萄糖單位）遇碘不顯色的呈色反應，來追蹤α淀粉酶作用于淀粉基質的水解過程，從而了

5、解酶的性質以及動力學參數(shù)。（1）0.2molmLNa2HPO4稱取35.60gNa2HPO4.2H2O，用水溶解定容至100mL。（2）使用酸度計，用檸檬酸調整至所需的PH值。3、供試酶液的制備稱取固體α液化淀粉酶1.00g，加入PH6.0磷酸氫二鈉–檸檬酸緩沖溶液100mL(緩沖液的加入量視酶活力大小而定，控制酶解反應在510min內完成)，于40℃恒溫水浴中活化0.5小時，然后用3000rpmmin離心機離心分離5min，酶提取液于

6、冰箱保存，供試驗用。4、標準比色液甲液：稱取氯化鈷（CoCl.6H2O）40.2439g、干燥重鉻酸鉀0.4748g，溶解并定容至500mL。乙液：稱取鉻黑T40.00mg，溶解并定容至100mL。使用時取甲液40.0mL、乙液5.0mL，混合?；旌媳壬阂朔胖帽浔４?，使用7天后重新配置。5、標準稀碘液。（二）儀器設備電熱恒溫水浴鍋。（三）操作方法1、用滴管吸取一定量標準比色液于白色瓷比色板空穴中，作為判斷酶解反應終點的標準色。2、不