江南大學1990-2009年生物化學歷年真題部分問答題答案

1、江南大學19902009年生物化學歷年真題部分問答題答案第1頁共17頁1、五只試劑瓶中分別裝的是核糖、葡萄糖、果糖、蔗糖和淀粉溶液，試用最簡便的化學方、五只試劑瓶中分別裝的是核糖、葡萄糖、果糖、蔗糖和淀粉溶液，試用最簡便的化學方法鑒別。法鑒別。答：答：依次使用下列化學試劑進行鑒定2、某一已純化的蛋白無、某一已純化的蛋白無SDS的凝膠電泳圖如下所示，兩種情況下的電極槽緩沖液都為的凝膠電泳圖如下所示，兩種情況下的電極槽緩沖液都為8.2從下面

2、兩副圖給出的信息，有關純化蛋白的結構你能得出什么結論？該蛋白的從下面兩副圖給出的信息，有關純化蛋白的結構你能得出什么結論？該蛋白的PI是大于還是大于還是小于是小于8.2？答：答：非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質時主要是根據各組分的pI的差別。圖（a）的結果只呈現(xiàn)單一的帶，根據題中給出的條件，表明該蛋白質是純凈的。由于SDS是一種帶負電荷的陰離子去垢劑，并且具有長長的疏水性碳氫鏈。它的這種性質不僅使寡聚蛋白質的亞基拆離，而且還能拆開肽鏈

3、的折疊結構，并且沿伸展的肽鏈吸附在上面。這樣，吸附在肽鏈上的帶負電荷的SDS分子使肽鏈帶凈負電荷，并且吸附的SDS量與肽鏈的大小成正比。結果是，不同大小的肽鏈將含有相同或幾乎相同的qr值。由于聚丙烯酰胺凝膠基質具有篩分效應，所以，分子較小的肽鏈將比較大的、但具有相同的qr值的肽鏈遷移得更快。若蛋白質是由單一肽鏈或共價交聯(lián)的幾條肽鏈構成（在不含β巰基乙醇的情況下），那么在用SDS處理后進行SDSPAGE，其結果仍是單一的一條帶。若蛋白質是

4、由幾條肽鏈非共價結合在一起，在用SDS處理后進行SDSPAGE，則可能出現(xiàn)兩種情況：一種仍是一條帶，但其位置發(fā)生了變化（遷移得更快），表明此蛋白質是由幾條相同的肽鏈構成，另一種可能出現(xiàn)幾條帶，則可以認為該蛋白質是由大小不同的幾條肽鏈構成。圖（b）的結果表明該蛋白質是由兩種大小不同的肽鏈借非共健結合在一起的寡聚體蛋白質。從圖（b）的電泳結果我們可以斷定該蛋白質的等電點低于8.2。3、含有以下四種蛋白質混合物：、含有以下四種蛋白質混合物：A

5、，分子量，分子量12000，pI=10；B，分子量，分子量62000，pI=3；C，分子量，分子量28000，pI=7；D，分子量，分子量9000，pI=5。若不考慮其他因素，當它們（。若不考慮其他因素，當它們（1）流過）流過DEAE纖維素陰離子交換柱時，用線性鹽洗脫時。纖維素陰離子交換柱時，用線性鹽洗脫時。（2）流經）流經SephadexG75凝膠過濾柱凝膠過濾柱時，這些蛋白質的洗脫順序如何？陰離子交換柱起始時，這些蛋白質的洗脫順序如

6、何？陰離子交換柱起始pH可選擇什么范圍?？蛇x擇什么范圍。江南大學19902009年生物化學歷年真題部分問答題答案第3頁共17頁為變性蛋白質。蛋白質變性的實質是蛋白質分子中的次級鍵破壞，引起天然構像解體，變性不涉及共價鍵的斷裂。蛋白質變性后許多性質發(fā)生了改變：（1）生物活性喪失：蛋白質的生物活性是指蛋白質具有的酶、激素、毒素、抗原與抗體等活性，以及其他特殊性質如血紅蛋白的載氧能力等，這是蛋白質變性的主要特征。（2）一些側鏈基團暴露：蛋白質

7、變性時、原來在分子內部保藏而不易與化學試劑起反應的側鏈基團，由于結構的伸展松散而暴露出來。（3）一些物理化學性質改變：蛋白質變性后，疏水基外露，溶解度降低，易形成沉淀析出；分子形狀也發(fā)生改變，球狀蛋白分子伸展，不對稱性加大，表現(xiàn)為粘度增加，旋光性、紫外吸收光譜等改變、擴散系數降低。（4）生物化學性質的改變：蛋白質變性后，分子結構伸展松散，易被蛋白水解酶分解。9、描述蛋白質的一級結構及高級結構，并說明一級結構與空間結構的關系。、描述蛋白質

8、的一級結構及高級結構，并說明一級結構與空間結構的關系。答：答：蛋白質是生物大分子，具有明顯的結構層次性，由低層到高層可分為一級結構、二級結構、三級結構和四級結構。蛋白質一級結構：是指肽鏈的氨基酸組成及其排列順序，包括二硫鍵的位置。氨基酸序列決定蛋白質的高級結構。蛋白質二級結構：是指蛋白質多肽鏈主鏈的空間走向（折疊和盤繞方式），是有規(guī)則重復的構象。天然蛋白質的二級結構主要有四種基本類型：α螺旋，β折疊和β轉角和無規(guī)卷曲。復雜的蛋白質分子結

9、構，就由這些比較簡單的二級結構單元進一步組合而成。蛋白質三級結構：多肽鏈在二級結構、超二級結構和結構域的基礎上進一步盤繞、折疊形成的緊密地借各種次級鍵維持的球狀分子構象。由兩條或兩條以上肽鏈通過非共價鍵構成的蛋白質稱為寡聚蛋白質。其中每一條多肽鏈稱為亞基，每個亞基都有自己的一、二、三級結構。亞基單獨存在時無生物活性，只有相互聚合成特定構象時才具有完整的生物活性。蛋白質四級結構：具有三級結構的多肽鏈通過次級鍵彼此締合形成的聚集體。每個具有

10、三級結構的多肽稱為亞基。四級結構就是各個亞基在寡聚蛋白的天然構象中空間上的排列方式。一級結構是蛋白質的共價鍵的全部情況，一級結構包含著決定高級結構的因素，蛋白質的種類和生物活性都與肽鏈的氨基酸種類和排列順序有關，蛋白質分子肽鏈的排列順序包含了自動形成復雜的三維結構（即正確的空間構象）所需要的全部信息，所以一級結構決定其高級結構，蛋白質的空間結構決定于蛋白質的一級結構。10、請設計一種測定蔗糖酶、請設計一種測定蔗糖酶Km及Vmax的實驗方

11、案，并做簡要說明。的實驗方案，并做簡要說明。答：答：采用如下幾種實驗方法進行測定：①V~[S]作圖法；②LineweaverBurk雙倒數作圖法；③HanesWoolf作圖法；④EadieHofstee作圖法；⑤Eisenthal和CnishBowden直接線性作圖法。LineweaverBurk雙倒數作圖法：在一系列不同[S]下，測定蔗糖酶的V，以1V對1[S]作圖，得一直線（如下圖所示）。直線的斜率=KmVmax，在1V軸（縱軸）上

12、的截距是1Vmax，在1[S]軸（橫軸）上的截距是1Km。（寫出LineweaverBurk方程）11、試述、試述DNA雙螺旋結構（雙螺旋結構（B結構）的理論要點（結構）的理論要點（哪種答法更好）哪種答法更好）答：答：（1）兩條反向平行的多核苷酸鏈（一條鏈的走向為5＇→3＇，另一條鏈的走向為3＇→5＇）圍繞同一中心軸形成右手雙螺旋；（2）磷酸和脫氧核糖形成的主鏈在外側，嘌呤堿和嘧啶堿在雙螺旋的內側，堿基平面垂直于中軸，糖環(huán)平面平行于中軸