胞漿型磷脂酶A-,2-及趨化因子MCP-1、MIP-1α在EAE發(fā)病中的作用.pdf

1、目的：1、建立以髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG)35-55多肽誘發(fā)的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)小鼠模型； 2、研究單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)和巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1a(MIP-1a)與EAE發(fā)病的關(guān)系； 3、探討胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)在EAE小鼠發(fā)病中的作用及其與MCP-1、MIP-1a的關(guān)系，探尋治療多發(fā)性硬化(MS)的新突破點(diǎn)； 4、研究干擾素(IFN)β-1b對EAE小鼠CNS中MCP

2、-1、MIP-1a表達(dá)的影響，探討IFNβ-1b對MS治療作用的機(jī)制。 方法：1、應(yīng)用MOG35-55多肽加福氏完全佐劑皮下注射免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型，對其進(jìn)行神經(jīng)功能評分并取腦和脊髓組織進(jìn)行HE染色及Luxolfastblue染色； 2、用免疫組織化學(xué)方法比較EAE小鼠發(fā)病初期、高峰期及恢復(fù)期脊髓中cPLA2、MCP-1、MIP-1a表達(dá)的變化，并通過免疫組化染色標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞，判斷MCP-

3、1、MIP-1a的細(xì)胞來源； 3、分別用200μl濃度為2mM或4mM的cPLA2特異性抑制劑—花生四烯酸三氟甲基酮(AACOCF3)以及10，000單位IFNβ-1b在免疫當(dāng)天至免疫后第16天隔日一次給小鼠注射，比較各干預(yù)組及對照組EAE小鼠臨床表現(xiàn)及高峰期病理改變，并用免疫組織化學(xué)及原位雜交技術(shù)比較各組脊髓中MCP-1、MIP-1a表達(dá)及MCP-1mRNA水平的差異。 結(jié)果：1、EAE組小鼠全部發(fā)病，發(fā)病時(shí)間為免疫后

4、16.1±3.9天，呈慢性單相病程；HE染色見大腦、小腦、腦干及脊髓中大量單個(gè)核細(xì)胞浸潤，血管周圍形成炎細(xì)胞袖套，白質(zhì)區(qū)明顯；Luxolfastblue染色見脊髓白質(zhì)脫髓鞘改變；雌、雄EAE小鼠的臨床及病理改變無明顯差別。 2、cPLA2在EAE發(fā)病初期及高峰期脊髓內(nèi)表達(dá)明顯增多，初期在絕大多數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，高峰期時(shí)血管周圍炎性細(xì)胞中表達(dá)則相對增多，恢復(fù)期時(shí)表達(dá)下調(diào)。 3、MCP-1、MIP-1a在EAE發(fā)病初期脊

5、髓中有少量表達(dá)，發(fā)病高峰期表達(dá)增高，而恢復(fù)期無表達(dá)。MCP-1主要由星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，MIP-1a主要由小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生。 4、IFNβ-1b干預(yù)組與非干預(yù)組相比明顯延遲了EAE小鼠發(fā)病并減輕了EAE癥狀，同時(shí)顯著下調(diào)脊髓中MCP-1、MIP-1a的表達(dá)及MCP-1mRNA的水平。 5、AACOCF3干預(yù)組EAE的臨床及病理改變均較非干預(yù)對照組明顯減輕，脊髓中MCP-1、MIP-1a的表達(dá)及MCP-1mRNA的水平也明顯減

6、低，上述改變與AACOCF3劑量呈量效相關(guān)性；大劑量AACOCF3對EAE的療效甚至優(yōu)于IFNβ-1b。 結(jié)論：1、以MOG35-55為抗原誘發(fā)的EAE模型發(fā)病率高、穩(wěn)定性強(qiáng)，病理改變接近MS，是研究MS的理想動(dòng)物模型； 2、趨化因子MCP-1、MIP-1a在EAE小鼠CNS不同膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，是EAE發(fā)病早期募集免疫反應(yīng)細(xì)胞向CNS浸潤的重要致炎性因子； 3、cPLA2參與EAE小鼠CNS中MCP-1及MIP-