瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)rna質(zhì)量

1、瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNARNA質(zhì)量質(zhì)量二材料與方法1材料RNA樣品2儀器、用具電泳儀、電泳槽、凝膠樣品梳、微波爐、移液器等3試劑(1)1TAE電泳緩沖液(2)溴化乙錠溶液（EB）[有毒，小心操作](3)瓊脂糖(4)6加樣緩沖液4方法(1)選擇孔徑大小適合的點(diǎn)樣梳，垂直架在膠版的一端，使點(diǎn)樣梳底部離電泳槽水平面的距離為0.51mm。(2)稱取0.25g瓊脂糖，加入25ml1TAE電泳緩沖液中，微波爐加熱使瓊脂糖溶解均勻。

2、(3)于50ml的離心管中加入1.25μlEB(10mgml)。(4)待凝膠冷卻至50℃左右，將凝膠倒入50ml離心管中。(5)將離心管中的凝膠溶液輕輕倒入電泳凝膠板上，除去氣泡。(6)待凝膠凝固后，小心取出點(diǎn)樣梳。(7)在電泳槽中加入1TAE電泳緩沖液，將膠板放入電泳槽中（點(diǎn)樣孔一端靠近電泳槽的負(fù)極），使電泳緩沖液沒過膠面。(8)待測(cè)樣品中加入16體積的6上樣緩沖液，混合后，移液槍點(diǎn)樣，記錄樣品點(diǎn)樣順序及樣量。(9)連接電泳槽與電泳儀

3、之間的電源線，正極為紅色，負(fù)極為黑色。(10)開啟電源，開始電泳，最高電壓不超過5Vcm。(11)當(dāng)指示劑跑過膠板的23，可終止電泳；切斷電源后，將電泳凝膠塊放在凝膠成像儀中觀察，拍照。電泳檢測(cè)：電泳檢測(cè)：1%瓊脂糖凝膠電泳，檢測(cè)RNA完整性，觀察18s、28s條帶。這里，RNA電泳要特別注意膠的濃度和質(zhì)量。首先，濃度不宜過高，1%1.2%為宜。其次，每次配膠不宜過多，最好現(xiàn)用現(xiàn)配，但是一次配100ml，35次可用完也可。溶膠時(shí)一定要溶

4、解徹底并且均勻，否則倒膠時(shí)產(chǎn)生氣泡，影響電泳效果。晾膠時(shí)，要以稍高于體溫為佳，溫度過高會(huì)導(dǎo)致膠體過軟，給點(diǎn)樣造成困難。倒膠時(shí)，注意膠的厚度，原則是寧厚勿薄，膠板過薄點(diǎn)樣孔盛放不下點(diǎn)樣量，樣品溢出導(dǎo)致彌散。膠板如果很厚，一般要晾置20分鐘以上，否則膠體晾置不徹底，拔掉梳子會(huì)破壞點(diǎn)樣孔，同時(shí)膠體密度也會(huì)變得不均一，影響電泳效果。對(duì)于RNA電泳，電泳液的要求也很高，最好每次都使用新的電泳液，因?yàn)镽NA極易降解，所以不宜與其他電泳液混用。同時(shí)，

5、要注意電泳液的配制，為1TAE，如果電泳液配制有誤則會(huì)導(dǎo)致電壓不穩(wěn)，或者電壓無法上升。最后，保證了電泳液和膠體質(zhì)量以后，就可以進(jìn)行點(diǎn)樣了。點(diǎn)樣時(shí)，要注意點(diǎn)樣量，以3μl為宜，與loadingbuffer混勻后要用移液槍將其完全吸取，完全點(diǎn)入點(diǎn)樣孔內(nèi)，不要有溢出，同時(shí)點(diǎn)樣時(shí)力度不宜過大，否則會(huì)使槍頭捅漏膠板，樣品流入電泳液，導(dǎo)致電泳失敗。電泳條件，由于RNA自身易降解的特點(diǎn)，建議使用高電壓，短時(shí)間電泳方式，130140v電壓，1015分鐘