藥學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文外文翻譯--聚丙烯酰胺凝膠上dna銀染法（譯文)

1、中文 中文 5945 字出處： 出處：Bassam B J, Gresshoff P M. Silver staining DNA in polyacrylamide gels[J]. Nature protocols, 2007, 2(11): 2649-2654.譯文： 譯文：聚丙烯酰胺凝膠上 DNA 銀染法Silver staining DNA in polyacrylamide gelsBrant J Bassam1 &

2、 Peter M Gresshoff2本文描述了一種簡(jiǎn)單但更優(yōu)越的銀染法，應(yīng)用于聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）之后的 DNA 片段以及其他有機(jī)分子顯像。其靈敏度與同位素放射方法相當(dāng)，能準(zhǔn)確檢測(cè) pg 單位量范圍內(nèi)的 DNA。該方法具有快速的優(yōu)點(diǎn)（～1h） ，而且運(yùn)用時(shí)主要是使用容易獲得的化學(xué)物質(zhì)和材料。為了達(dá)到預(yù)期的靈敏度和清晰度，高質(zhì)量的試劑和潔凈的操作顯得尤為重要。雖然本文所描述的最新方法是基于 Bassam et a 方法的廣

3、泛使用，但是可提供更高對(duì)比度的圖像，且可降低人為污染染色的風(fēng)險(xiǎn)。介紹 介紹用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)分離的復(fù)雜 DNA 樣品和其他生物分子具有較高的分辨率，且該方法已被運(yùn)用的非常廣泛。然而，為了實(shí)現(xiàn) PAGE 的潛在優(yōu)點(diǎn)，我們還需要有一種能夠提供更高清晰度和靈敏度的染色方法。基于這一點(diǎn)，本文描述的銀染法符合這個(gè)要求。作為一種染色方法，最初發(fā)展銀染法的目的是為了檢測(cè) PAGE 分離后的蛋白質(zhì)。之后，該方法被進(jìn)一步優(yōu)化，并應(yīng)用于其他生

4、物分子的檢測(cè)，如核酸，脂多糖類，糖蛋白類和多糖類。但是這些早期方法的操作相對(duì)繁瑣，且靈敏度有限。Caetano-Anolle´s et al 對(duì)于 DNA 指紋譜圖放大技術(shù)（DAF）的發(fā)展要求一種更好的方法來(lái)充分地辨析和顯像復(fù)雜的 DNA 圖譜。這些要求直接導(dǎo)致聚酯—聚丙烯酰胺凝膠與 DNA 銀染法相結(jié)合和發(fā)展。Bassam et al.單獨(dú)地描述了為DAF 而發(fā)展的銀染法，該方法已經(jīng)被廣泛地接受，包括在商業(yè)領(lǐng)域（如GeneP

5、rint STR 系統(tǒng)，美國(guó)的 Promega 公司的銀后續(xù)產(chǎn)品） 。DNA（其他生物樣品）銀染法有如下優(yōu)點(diǎn)：第一，在正常環(huán)境光度下可進(jìn)行圖像的形成和顯像。因此，該過(guò)程可以在實(shí)驗(yàn)定影液顯影液顯影終止劑1.2 1.2 設(shè)備 設(shè)備帶龍頭的塑料盛酸容器（普通實(shí)驗(yàn)室供給）普通實(shí)驗(yàn)室手套，關(guān)鍵：無(wú)粉手套搖床或軌跡震蕩儀（普通實(shí)驗(yàn)室供給）盛放銀溶液容器（向沉淀的銀中加入 NaCl） （普通實(shí)驗(yàn)室供給）垃圾清理工具，普通實(shí)驗(yàn)室供給可選：為了把最初的凝

6、膠完好地保存，我們用聚酯—聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行，Bassam and Bentley 描述的一種最新的方法。循環(huán)水泵第二代微型蛋白初產(chǎn)物儀索尼 DSC R1 數(shù)碼相機(jī)1.3 1.3 試劑的制備 試劑的制備1.3.1 定影液：用去離子水將冰醋酸稀釋至 7.5%，室溫保存(18－25 1C)。一個(gè)容積適合的帶龍頭塑料容器。定影液較穩(wěn)定，可大量配制。注意：溶液有輕微的腐蝕性（家用食醋的濃度為 5%） ，禁止吸入其蒸氣。1.3.2 甲醛溶液:向

7、85ml 的去離子水中加入 15ml 的甲醛。注意:該溶液的組成成分有毒性，應(yīng)小心操作。參考當(dāng)?shù)芈殬I(yè)健康與安全法規(guī)。關(guān)鍵：該溶液必須現(xiàn)配，確保甲醛在室溫下保存，因?yàn)槔洳兀ㄈ?4℃）會(huì)失活。關(guān)鍵：在準(zhǔn)備之前，須估量容器是否足夠盛放要染色的凝膠的數(shù)量和大小。1.3.3 銀溶液：將 0.1g 的硝酸銀溶入 100ml 的去離子水中。注意:該溶液的組成成分有毒性，應(yīng)小心操作。參考當(dāng)?shù)芈殬I(yè)健康與安全法規(guī)。關(guān)鍵：該溶液必須現(xiàn)配。關(guān)鍵：在準(zhǔn)備之前，估