水合淫羊藿素(Icaritin)對(duì)K562白血病細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用觀察及機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)是一種起源于多能造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病,其白血病細(xì)胞具有特征性的t(9;22)(q34;q11)染色體易位(Ph染色體)并形成Bcr/Abl融合基因。該融合基因編碼的p210 Bcr/Abl蛋白具有極強(qiáng)的酪氨酸激酶活性,可使白血病細(xì)胞發(fā)生增殖失控、分化受阻和凋亡障礙等改變。CML的治療方法主要包括羥基脲、α-干擾素、異基因造血干細(xì)胞移植和近

2、年來(lái)成為CML慢性期一線(xiàn)治療的甲磺酸伊馬替尼(格列衛(wèi),Imatinib,STI571)。上述治療方法的應(yīng)用,較大的改善了CML的預(yù)后,但目前臨床上仍存在如格列衛(wèi)耐藥,CML進(jìn)展期治療效果不佳等棘手的問(wèn)題。因此,尋找新的治療方法仍是CML研究的主要目標(biāo)之一。K562細(xì)胞系是人類(lèi)紅白血病細(xì)胞系,有特征性的費(fèi)城染色體(Ph),既具有急性白血病細(xì)胞的特點(diǎn),也具有CML細(xì)胞特有的本質(zhì)。此外,其在受到不同因素的誘導(dǎo)時(shí),具有向紅系、單核系或巨核細(xì)胞系

3、分化的潛力。因此,K562細(xì)胞現(xiàn)已成為體外研究細(xì)胞分化和篩選新的抗白血病藥物的主要細(xì)胞模型。最近有研究證實(shí),淫羊藿苷(Icariin)作為淫羊藿的主要單體成分,具有多種生物活性,可誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化,也可誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells)向心肌細(xì)胞方向分化,且其機(jī)制與P38MAPK的激活有關(guān)。水合淫羊藿素(Icaritin)是從淫羊藿提純出的苷,與糖結(jié)合后經(jīng)水解而成,具有抑制雌激素受體作用,分子量為368

4、。本研究室的前期研究發(fā)現(xiàn)Icaritin能以濃度依賴(lài)性方式有效地抑制K562細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡,提示Icaritin具有抗CML的作用。為進(jìn)一步觀察Icaritin的抗CML效應(yīng)及機(jī)制,本研究用不同濃度Icaritin干預(yù)K562細(xì)胞,觀察其能否誘導(dǎo)K562細(xì)胞向成熟細(xì)胞分化,并對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行探討。
　　第一部分Icaritin對(duì)K562細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用觀察
　　研究目的:確定Icaritin是否能誘導(dǎo)K562

5、細(xì)胞向紅系分化。
　　方法:用不同濃度Icaritin(0~64μmol/L)作用于K562細(xì)胞6天,采用瑞氏-吉姆薩染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白測(cè)定、聯(lián)苯胺染色陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)K562細(xì)胞膜CD71和CD235a紅系分化抗原表達(dá)等方法評(píng)價(jià)Icaritin對(duì)K562細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用。
　　結(jié)果:不同濃度的Icaritin均可升高K562細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量;上調(diào)K562細(xì)胞膜CD71和CD235a分化抗

6、原的表達(dá);并在形態(tài)上有趨向紅系分化的改變,其中以濃度為8μmol/L的Icaritin作用最為顯著。
　　結(jié)論:Icaritin有誘導(dǎo)K562細(xì)胞向紅系分化的作用。
　　第二部分Icaritin對(duì)K562細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用的機(jī)制研究
　　研究目的:觀察Icaritin作用下K562細(xì)胞向紅系分化過(guò)程中JNK、P-JNK、ERK、P-ERK、P38及P-P38等增殖分化相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化,部分揭示Icaritin誘導(dǎo)K

7、562細(xì)胞向紅系分化的分子機(jī)制。
　　方法:8μmol/L的Icaritin持續(xù)干預(yù)K562細(xì)胞8天,分別于第0、2、4、6、8天提取各組細(xì)胞總蛋白,Western印跡檢測(cè)JNK、ERK、P38表達(dá)及相應(yīng)的磷酸化水平變化。
　　結(jié)果:干預(yù)時(shí)間內(nèi),Icaritin下調(diào)ERK的磷酸化水平;第4-8天,Icartin能持續(xù)性上調(diào)P38的磷酸化水平;磷酸化JNK呈先上調(diào)后下調(diào)的變化;但I(xiàn)caritin對(duì)ERK、JNK及P38蛋白表達(dá)