地中海擬無枝酸菌分支酸合酶基因失活的研究.pdf

1、利福霉素是在抗結(jié)核、麻風和艾滋病病發(fā)癥中應用廣泛的重要抗生素，基因調(diào)控策略作為提高利福霉素生物合成的有效方法之一。為此，本論文以利福霉素工業(yè)生產(chǎn)菌—地中海擬無枝酸菌為研究對象，探究了基因失活菌株的構(gòu)建方法，為構(gòu)建工業(yè)高產(chǎn)菌株提供可行性依據(jù)。
　　由于地中海擬無枝酸菌屬于革蘭氏陽性菌，外源基因?qū)氡容^困難，且外源基因?qū)肼实拇笮≈苯佑绊懲粗亟M的幾率，所以本論文首先優(yōu)化了地中海擬無枝酸菌電擊轉(zhuǎn)化條件。以大腸桿菌—擬無枝酸菌穿梭質(zhì)粒p

2、ULVK1-Am為載體，地中海擬無枝酸菌為受體菌，考察了收集菌體時期、細胞壁弱化方式、電擊緩沖液和電擊參數(shù)等因素對轉(zhuǎn)化率的影響。結(jié)果表明以0.1μg/mL氨芐青霉素處理細胞，OD600為0.7-0.8時收集菌體，用溶菌酶-LiAc-DTT溶液于37 ℃孵育30 min，去離子水作電擊緩沖液，7.5 KV/cm、25μF、750下進行電擊，轉(zhuǎn)化率最高可達到9.23×104 CFU/μg質(zhì)粒DNA。
　　由于基因工程改造的工業(yè)生產(chǎn)菌株