金屬硫蛋白細胞表面展示提高酵母對重金屬吸附的能力.pdf

1、碩士學位論文金屬硫蛋白細胞表面展示提高酵母對重金屬吸附的能力EnhancedBiosorptionofHeavyMetalbyDisplayingMetallothioneinonCellSurfaceofSaccharomycescerevisiae學21218116完成日期：2Q!壘151壘大連理工大學DalianUniversityofTechnology大連理工大學碩士學位論文摘要本論文利用細胞表面展示蛋白a凝集素將金屬硫蛋白表

2、達在酵母細胞(Saccharomycescerevisiae)表面，其中金屬硫蛋白基因通過HO位點整合在酵母染色體上，最終獲得對cd2、Cu2和Cr6具較高耐受性和吸附性能的重組菌ScerevisiaeHACg，并對其吸附重金屬Cd2、Cu2和Cr6的機理進行探討。利用PCR的技術(shù)獲得了Scerevisiae288c金屬硫蛋白基因cupl，將cupl連接到pYDl質(zhì)粒中以構(gòu)建金屬硫蛋白細胞表面展示游離載體pYD]／cupl然后從pYDl

3、／cupl中克隆出金屬硫蛋白細胞表面展示盒子AGA2一cupl及從Scerevisiae288c獲得3一磷酸甘油酸激酶啟動子基因跏茁』，以HO2作為出發(fā)載體構(gòu)建金屬硫蛋白細胞表面展示整合載體HACg和空載對照HAg。將HACg和HAg分別轉(zhuǎn)入Scerevisiae4126中，得到重組菌ScerevisiaeHACg、ScerevisiaeHAg。scerevisiaeHACg對重金屬耐受性和吸附性能研究表明，ScerevisiaeHAC

4、g對Cd2、Cu2和C，的耐受性與出發(fā)菌株相比有顯著提高；與對照菌株相比，ScerevisiaeHACg對Cd2(50rag／L)的去除率可提高1939％；ScerevisiaeHACg對Cu2(50me／L)的去除率可提高1335％：ScerevisiaeHACgCr6(50me／L)還原所需時間與出發(fā)菌株比較縮短6h，可降低3333％，對總Cr的去除率與出發(fā)菌比可提高了1013％。掃描電鏡結(jié)果表明，重金屬吸附以后金屬硫蛋白細胞表面展

5、示菌體表面皺縮程度及菌體凹陷程度要遠小于對照菌株，說明金屬硫蛋白在細胞表面表達對酵母菌抵制重金屬的毒害作用具有重要的作用：傅里葉紅外光譜結(jié)果表明，酵母細胞中羧基、羥基、氨基、磷酸基及酰胺基是參與重金屬離子結(jié)合的主要官能團，而金屬硫蛋白在酵母細胞表面表達后對細胞參與金屬離子結(jié)合的官能團沒有影響；微生物電化學結(jié)果分析表明：金屬硫蛋白在細胞表面表達細胞表面官能團數(shù)量增加，酵母菌吸附重金屬以后，酵母細胞表面的官能團得失電子能力發(fā)生改變。等溫吸附