植物金屬硫蛋白擬南芥細(xì)胞表達(dá)與抗重金屬能力研究.pdf

1、金屬硫蛋白是廣泛存在于生物體內(nèi)的一種富含巰基的功能性蛋白，其分子量根據(jù)不同物種來源在6～14千道爾頓之間有所變化，但氨基酸的保守序列有極高的同源性。研究證明，金屬硫蛋白的內(nèi)含巰基通過氧化還原過程具備了在生物體內(nèi)攜帶和轉(zhuǎn)移雙價(jià)金屬離子的功能。 本研究金屬硫蛋白(BjMT-2)cDNA克隆基因分離于芥菜屬印度芥菜(Brassicajuncea)。將BjMT-2基因與綠色熒光蛋白報(bào)告基因融合，構(gòu)建瞬時(shí)表達(dá)載體pFF19/BjMT-2：

2、：GFP，對(duì)照pFF19/GFP，穩(wěn)定表達(dá)載體pBINA/BjMT-2：：GFP及對(duì)照pBINA/GFP，用PEG介導(dǎo)的方法將pFF19/BjMT-2：：GFP及對(duì)照瞬時(shí)轉(zhuǎn)入擬南芥原生質(zhì)體中表達(dá)，基因槍法將pBINA/BjMT-2：：GFP與pBINA/GFP轉(zhuǎn)入擬南芥表皮細(xì)胞，在激光共聚焦掃描顯微鏡下利用GFP所發(fā)出的綠色熒光對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行熒光跟蹤。BjMT-2作為外源基因在轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)后，可能被轉(zhuǎn)運(yùn)到原生質(zhì)內(nèi)特定的靶器官以發(fā)揮

3、相應(yīng)的特定或輔助的功能，或因過量表達(dá)而被轉(zhuǎn)運(yùn)到液泡中或直接排出體外，液泡目前認(rèn)為是隔離或降解對(duì)植物細(xì)胞質(zhì)內(nèi)各種重要酶類有毒害作用的物質(zhì)的重要器官。 BjMT-2作為外源基因轉(zhuǎn)入模式植物擬南芥中表達(dá)，經(jīng)篩選得到陽性植株，收獲子二代種子以供重金屬脅迫實(shí)驗(yàn)。本文試圖確定外源BjMT-2基因在植物細(xì)胞中表達(dá)后植物所可能具備的抵御重金屬環(huán)境的能力，并對(duì)可能的重金屬結(jié)合機(jī)制進(jìn)行分析和推測(cè)。根據(jù)植物對(duì)重金屬拮抗能力的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，轉(zhuǎn)BjMT-2的