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1、目的:本文通過(guò)研究及比較芝麻素與AG490在動(dòng)脈粥樣硬化形成過(guò)程中對(duì)兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞JAK1表達(dá)的影響,探討芝麻素在抗動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制中的作用。
方法:(1)兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及傳代。用傳代成功后的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(2)細(xì)胞分組及處理:①正常對(duì)照組:在無(wú)菌條件下,將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞于無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)24-48小時(shí);②ox-LDL組:將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞在100mg/L濃度的ox-LDL培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小
2、時(shí),然后在無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí);③AG490(JAK1抑制劑)組:將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)于50μ mol/L的AG490培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí),然后在ox-LDL培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí),最后在無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí);④芝麻素組:將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞在芝麻素培養(yǎng)基(60μ mol/L)中培養(yǎng)24小時(shí),然后在100mg/L的ox-LDL培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí),最后在無(wú)血清的DEME培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí)。(3)采用Real-timePC
3、R方法檢測(cè)兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖過(guò)程中芝麻素、AG490對(duì)JAK1表達(dá)的影響。
結(jié)果:正常對(duì)照組:兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞為梭形或多角形,胞漿豐富,邊界清楚,可見(jiàn)典型的呈“鋪路石狀”鑲嵌排列的細(xì)胞,單層分布。ox-LDL組:兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞圓形細(xì)胞明顯增多,邊界不清,數(shù)目明顯減少,凋亡小體出現(xiàn),細(xì)胞碎片增多,細(xì)胞間隙變寬,偶有脫落。芝麻素組:兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈多角形或梭形,邊界清楚,排列接近正常對(duì)照組,但細(xì)胞數(shù)少于正常對(duì)照組細(xì)胞且多于o
4、x-LDL組。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析,在250bp處出現(xiàn)一條特異性條帶。成功擴(kuò)增出兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞JAK1基因。以稀釋的重組質(zhì)粒作為PCR反應(yīng)的模板,分別以各參數(shù)的上、下游引物為引物,經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析表明,在2945bp處出現(xiàn)一條特異性條帶。成功的擴(kuò)增出兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞JAK1基因的克隆質(zhì)粒。ox-LDL組,芝麻素組,AG490組JAK1-mRNA表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組,有顯著性差異P<0.05;芝麻素組與AG490
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