二硫化鉬介導的Plk1基因沉默對肝癌細胞的影響.pdf

1、目的:探討聚乙二醇修飾的二硫化鉬作為基因載體的可行性及介導Plk1基因?qū)Ω伟┘毎挠绊憽?br>　　方法:
　　1)采用化學剝離法合成了二硫化鉬（MoS2）納米片，再用高分子聚合物聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)、聚乙烯亞胺(polyethylenimine, PEI)層層修飾為MoS2-PEG-PEI，并對合成的二硫化鉬材料進行表征研究。
　　2)通過體外細胞毒性試驗對二硫化鉬納米材料進行體外毒

2、性實驗。
　　3)用凝膠阻滯電泳實驗檢驗二硫化鉬納米材料和小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）的結合能力。
　　4)以MoS2-PEG-PEI材料作為siPlk1的載體，對人肝癌細胞株（HepG2細胞）進行轉(zhuǎn)染，通過共聚焦顯微鏡觀察細胞攝取 MoS2-PEG-PEI/siRNA復合物情況。
　　5)通過 Western blotting以及RT-qPCR實驗研究MoS2-PEG-PEI

3、介導的siPlk1轉(zhuǎn)染對肝癌細胞蛋白及mRNA表達水平的影響，并通過流式細胞技術觀察肝癌細胞的凋亡情況。
　　結果:
　　1)單層二硫化鉬納米片進行了LA-PEG修飾和加聚PEI支鏈后，所得到的MoS2-PEG-PEI，具有較好的穩(wěn)定性，并帶有正電荷； MoS2、MoS2-PEG的Zeta電位分別為?17.9 and-8.9 mV。MoS2-PEG聚合帶正電荷的PEI涂層后Zeta電位增加為19.9 mV，帶有更多正電荷

4、r>　　2)MoS2, MoS2-PEG和 MoS2-PEG-PEI均無明顯細胞毒性。
　　3)當N/P比在5以上時，凝膠電泳結果顯示MoS2-PEG-PEI明顯阻滯siRNA。
　　4)共聚焦顯微鏡顯示MoS2-PEG-PEI/siRNA成功轉(zhuǎn)染HepG2細胞。
　　5）Western blotting以及RT-qPCR實驗結果均表明，MoS2-PEG-PEI/siRNA沉默HepG2細胞相關蛋白表達。
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