PLK1基因沉默抑制淋巴瘤Raji細胞增殖和侵襲.pdf

1、[目的]Polo樣激酶1(PLK1)是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，在調節(jié)細胞周期、維持基因組穩(wěn)定和修復DNA損傷中起重要作用。研究表明PLK1在人類多數(shù)腫瘤中高表達，前期實驗也發(fā)現(xiàn)EBV轉化淋巴母細胞中PLK1表達上調。本實驗通過體外細胞實驗及動物實驗，觀察RNA干擾PLK1表達對淋巴瘤Raji細胞增殖、遷移侵襲、細胞周期和凋亡以及裸鼠移植瘤形成等生物學行為的影響，研究PLK1在EBV相關淋巴瘤發(fā)生中的作用，為淋巴瘤的分子機制研究與靶向治療

2、提供實驗依據(jù)。
　　[方法]構建針對 PLK1基因的慢病毒干擾載體 pLenR-GPH-hPLK1-sh，建立PLK1穩(wěn)定低表達的Raji細胞系，倒置熒光顯微鏡觀察細胞內綠色熒光情況，經過qRT-PCR及Western Blot技術驗證PLK1干擾效果。采用CCK-8、流式細胞術、遷移侵襲實驗及裸鼠成瘤實驗，觀察PLK1表達改變前后淋巴瘤Raji細胞生物學行為的變化。
　　[結果]
　　1.成功建立PLK1穩(wěn)定低表達的

3、Raji細胞系。重組質粒酶切電泳結果與預期相符，質粒測序結果經BLAST比對顯示，目的基因的干擾質粒pLenR-GPH-hPLK1-sh與設計的干擾序列吻合率達100％，證明載體構建成功；熒光顯微鏡觀察顯示轉染組攜帶綠色熒光的細胞數(shù)達80%；qRT-PCR、Western Blot檢測表明轉染pLenR-GPH-hPLK1-sh質粒的細胞（干擾組，Raji/PLK1 shRNA）較轉染pLenR-GPH的細胞（空載體組，Raji/GPH

4、）和普通Raji細胞（空白組）相比，PLK1基因的mRNA表達及蛋白水平均明顯降低，表明成功建立PLK1穩(wěn)定低表達的Raji細胞系。且干擾組PLK1-SH1中PLK1 mRNA水平下降更為明顯，提示干擾效果最好，所以選取PLK1-SH1組進入后續(xù)實驗。
　　2.干擾PLK1表達可抑制淋巴瘤 Raji細胞的增殖、遷移侵襲能力，誘導G2期阻滯和凋亡，并抑制裸鼠移植瘤的形成。
　　CCK-8結果顯示：干擾組較空載體組及空白組相比，

5、生長速度慢，且差異具有統(tǒng)計學意義，表明干擾PLK1表達可抑制Raji細胞的增殖。
　　遷移侵襲實驗結果顯示：干擾組較空載體組及空白組相比，遷移細胞數(shù)較少，差異有統(tǒng)計學意義；干擾組穿過Matrigel基質膠的細胞數(shù)明顯少于空載體組及空白組，差異有統(tǒng)計學意義，表明干擾PLK1的表達可抑制淋巴瘤Raji細胞的遷移和侵襲能力。
　　流式細胞術結果顯示：干擾組較空載體組及空白組相比，G2期細胞百分比顯著升高，G1期細胞百分比降低；細胞