Semaphorin 3A殼聚糖微球-絲素基α磷酸三鈣骨水泥細(xì)胞毒性及成骨性能研究.pdf

1、目的：制備復(fù)合Semaphorin3A殼聚糖微球-絲素基α-磷酸三鈣骨水泥(Semaphorin3A Chitosan Microspheres/Silk Fibroin/α-Tricalcium,Sema3A CMs/SF/α-TCP)，并對(duì)該材料進(jìn)行細(xì)胞毒性及體外成骨性能評(píng)估。
　　方法：
　　1.通過將家蠶生絲脫膠、溶解、透析、濃縮四個(gè)步驟制備絲素溶液，使用乳化交聯(lián)法制備微米級(jí)殼聚糖微球，使用膨脹吸附法制備Sema3A

2、載藥殼聚糖微球，使用液-固法制備Sema3A CMs/SF/α-TCP，同時(shí)制備CMs/SF/α-TCP及SF/α-TCP。
　　2.使用Sema3A ELISA試劑盒對(duì)CM的載藥情況和Sema3A CMs/SF/α-TCP的藥物釋放性能進(jìn)行檢測(cè)。
　　3.制備材料浸提液，使用浸提液培養(yǎng)MC3T3-E1細(xì)胞系，設(shè)定陰性對(duì)照組和陽性對(duì)照組，通過MTT法及培養(yǎng)液乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase, LDH）活

3、性測(cè)定檢測(cè)材料的細(xì)胞毒性。4.將MC3T3-E1細(xì)胞分別種植于Sema3A CMs/SF/α-TCP、CMs/SF/α-TCP及SF/α-TCP材料表面，使用掃描電鏡觀察Sema3A CMs/SF/α-TCP材料表面的細(xì)胞形態(tài)，分別檢測(cè)其細(xì)胞培養(yǎng)液中的堿性磷酸酶（Alkline Phosphatase, ALP）活性，并通過RT-qPCR，檢測(cè)其成骨相關(guān)基因 Runx2、Col-1及ALP的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.使

4、用乳化交聯(lián)法成功制備出微米級(jí)殼聚糖微球，微球形態(tài)規(guī)則，分散良好。微球載藥率為0.41μg/mg，Sema3A CMs/SF/α-TCP材料可持續(xù)釋放Sema3A達(dá)30天，第30天的釋放率為91.73％。
　　2. Sema3A CMs/SF/α-TCP材料的細(xì)胞毒性為0級(jí)或1級(jí)。
　　3.MC3T3-E1細(xì)胞系在材料表面形態(tài)良好，能夠伸出偽足貼附于材料表面。
　　4. Sema3A CMs/SF/α-TCP組的細(xì)胞培養(yǎng)

5、液ALP活性在培養(yǎng)后的第14天和第21天高于其他分組，其中14天時(shí)間點(diǎn)各組ALP活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），21天時(shí)間點(diǎn)的ALP活性差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。5.在培養(yǎng)后的14天，Sema3A CMs/SF/α-TCP組中的成骨相關(guān)基因表達(dá)高于其他實(shí)驗(yàn)分組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：復(fù)合Sema3A CMs/SF/α-TCP材料能夠有效負(fù)載Sema3A并緩慢釋放Sema3A，支持MC3T3