基于樹狀高分子的生物樣品中磷酸肽檢測研究.pdf

1、蛋白質(zhì)磷酸化是一種重要的翻譯后修飾，它調(diào)節(jié)著細(xì)胞的信號傳導(dǎo)、細(xì)胞分化、細(xì)胞生長、細(xì)胞凋亡等幾乎所有的生命活動，也被形象地描述為細(xì)胞生理活動的開關(guān)。目前已知有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起，而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導(dǎo)致的后果。因此，對蛋白質(zhì)磷酸化的研究有助于全面理解蛋白質(zhì)的各項功能及機(jī)理。蛋白質(zhì)磷酸化的研究方法是先將蛋白質(zhì)酶解，然后利用質(zhì)譜對磷酸肽的氨基酸序列和磷酸化位點進(jìn)行準(zhǔn)確地鑒定。但磷酸肽的離子化效率差，而且非磷酸肽

2、的存在也抑制磷酸肽的質(zhì)譜信號，這些原因?qū)е吕觅|(zhì)譜直接對磷酸肽進(jìn)行分析面臨很大困難。因此在質(zhì)譜分析前需要對磷酸肽進(jìn)行特異性富集。
　　 本論文成功合成了樹狀聚合物-硅膠固相載體材料，利用固定金屬離子親和色譜技術(shù)對樹狀聚合物-硅膠固相載體材料的表面修飾固定Ti4+離子，固定金屬離子親和色譜技術(shù)是通過鍵合在鰲合底物上的金屬離子特異性地與磷酸化肽相結(jié)合，并且在高pH中可以釋放出磷酸化肽，從而實現(xiàn)其與非磷酸化肽的分離，由于樹狀聚合物的表

3、面是多枝狀結(jié)構(gòu)，且含有大量的氨基，氨基吸附Ti4+具有很好的穩(wěn)定性，并考察了其對磷酸肽的富集效果。利用標(biāo)準(zhǔn)磷酸化蛋白β-casein對其富集效率進(jìn)行評價。實驗中對富集條件進(jìn)行優(yōu)化，上樣液中有機(jī)溶劑的濃度為50％的乙腈、酸的種類為三氟乙酸、濃度為0.1％、清洗次數(shù)為1次和洗脫液為0.4 mol/L氨水，結(jié)果表明此方法對磷酸肽有較高的選擇性，且檢測限達(dá)到10-9 mol/L。模擬復(fù)雜的生物樣品，利用β-casein與BSA摩爾比為1∶100