五味子乙素對(duì)大鼠創(chuàng)傷性急性肺損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：采用重物高處自由墜落的方法復(fù)制大鼠創(chuàng)傷性急性肺損傷（ALI)模型，觀察肺損傷過(guò)程中氧化應(yīng)激反應(yīng)通路的變化，及五味子乙素對(duì)大鼠外傷性急性肺損傷干預(yù)的作用，并通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化物丙二醛（MDA)含量的改變、抗氧化活性酶超氧化物歧化酶（SOD)活性的改變及iNOS蛋白表達(dá)的變化，來(lái)初步解釋作用的機(jī)制。為中藥五味子在治療創(chuàng)傷性急性肺損傷的臨床應(yīng)用上提供理論支持。
　　方法：選取健康SD大鼠50只，使用數(shù)字隨機(jī)法，隨機(jī)分為對(duì)照組(Cont

2、rol group)(n=10)、模型組（Model group，n=10)、五味子乙素低劑量組(SchB-LD group，n=10)、五味子乙素高劑量組(SchB-HD group，n=10)和地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組(Dex-Group，n=10)，共5組。模型組和各實(shí)驗(yàn)組大鼠水合氯醛腹腔麻醉后，使用自制鈍性胸外傷實(shí)驗(yàn)臺(tái)，以500g的鋼制撞擊錘從40.8cm高度落下，達(dá)到2.0J的撞擊能量，建立創(chuàng)傷性肺損傷模型。SchB-LD組、Sch

3、B-HD組造模結(jié)束后，立即腹腔注射準(zhǔn)備好低、高濃度的五味子乙素注射劑（五味子乙素溶于PBS)，每2h—次，共3次。地塞米松對(duì)照組同時(shí)分次注射地塞米松注射液。對(duì)照組不做處理，正常飼養(yǎng)。各組鼠分籠飼養(yǎng)，自由飲食，觀察生存狀態(tài)。在0～48h中，從活動(dòng)狀況、呼吸狀態(tài)、皮毛色澤、覓食覓水頻率等方面觀察記錄各組大鼠的生存情況，每4h為一個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)統(tǒng)計(jì)大鼠死亡數(shù)量。使用Kaplan-Meier法計(jì)算繪制各組大鼠和對(duì)照與治療（高、低五味子乙素）組的生存

4、曲線，并進(jìn)行Log Rank分析。所有大鼠觀察48h后處死，解剖取材。固定后的肺組織常規(guī)脫水、石蠟包埋，2^m層厚切片，HE染色觀察各組鼠肺的組織病理學(xué)改變；按試劑盒方法檢測(cè)肺組織MDA濃度、超氧化物歧化酶SOD活性；免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)誘導(dǎo)性一氧化氮合酶iNOS表達(dá)。
　　結(jié)果：與對(duì)照組比較，模型組大鼠肺的水含量（濕重/干重比）顯著升高；肺組織的ALI病理評(píng)分明顯增高；模型組大鼠肺組織MDA水平明顯增高，SOD活性下降，iNOS

5、蛋白的表達(dá)率顯著上升。提示氧自由基顯著增多，抗氧化能力減弱，各項(xiàng)指標(biāo)均出現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的顯著改變，表明本研究制備的外傷致ALI模型成功可靠。
　　治療組（高、低劑量五味子乙素組）大鼠與模型組大鼠比較，48h生存曲線具有顯著差異，生存率明顯提高。（x2=7.16，p<0.01，HR(Mantel-Haenszel)=5.33)。與模型組比較，高劑量五味子乙素組的生存曲線具有顯著差異：（x2=6.03，p<0.01，HR(Mantel

6、-Haenszel)=5.03);高、低劑量五味子乙素組和地塞米松對(duì)照組間生存率無(wú)明顯差異（x2=0.79，p=0.67)。
　　對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，模型組肺組織含水量較對(duì)照組顯著增多(p<0.01)，高、低劑量五味子乙素處理組較模型組肺的含水量顯著降低（p<0.01);高、低劑量的五味子乙素處理組之間比較：高劑量組的肺含水量有所降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.07)。高、低劑量五味子乙素處理組肺組織的ALI病理評(píng)分顯著低于模型組(

7、p<0.01)，具體表現(xiàn)為炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕，透明膜明顯減少，高劑量五味子乙素組與低劑量五味子乙素組肺組織的ALI病理評(píng)分之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.6)。陽(yáng)性對(duì)照組的病理評(píng)分與五味子乙素組之間比較無(wú)明顯差異。
　　模型組和高、低量的五味子乙素組的組織勻漿中MDA的水平均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。高、低劑量的五味子乙素組組織勻漿中MDA水平顯著低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。與低劑量五味

8、子乙素組相比，高劑量五味子乙素組MDA水平降低幅度更大，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。模型組勻漿中SOD活性顯著低于對(duì)照組(p<0.01);高、低劑量的五味子乙素組的組織勻漿中SOD活性均顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)One-Way ANOVA分析，在高、低劑量五味子乙素組和地塞米松組之間，組織勻漿中SOD活性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異(F=2.549，p=0.09)。
　　iNOS蛋白表達(dá)評(píng)分：模型組的評(píng)分顯著高于對(duì)照組；高、低

9、劑量的五味子乙素治療組評(píng)分顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。經(jīng)One-Way ANOVA分析，高、低劑量五味子乙素組和地塞米松組間的iNOS蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異(F=2.35，p=0.11)。與模型組比較各項(xiàng)指標(biāo)均的到顯著改善：肺水含量（濕重/干重比）降低，提示肺泡上皮細(xì)胞通透性降低；肺組織的ALI病理評(píng)分顯著降低，MDA水平顯著降低，SOD活性提高，iNOS蛋白的表達(dá)率顯著降低，提示五味子乙素干預(yù)能抑制肺部氧化應(yīng)激反應(yīng)，