五味子乙素抗肝癌的實(shí)驗(yàn)研究及固體脂質(zhì)納米粒的制備.pdf

1、目的：研究五味子乙素（Schisandrin B，Sch B）對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞的增殖、凋亡及內(nèi)化阿霉素效應(yīng)的影響；并將其制成固體脂質(zhì)納米粒。
　　方法：MTT還原法檢測(cè)五味子乙素對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞作用72小時(shí)增殖抑制率的影響。體外培養(yǎng)豬內(nèi)皮細(xì)胞(pEC)和人白血病細(xì)胞（K562），建立流式細(xì)胞術(shù)分析阿霉素細(xì)胞內(nèi)化特異熒光的檢測(cè)方法。阿霉素單獨(dú)或與不同濃度的五味子乙素共同處理4小時(shí)，流式細(xì)胞術(shù)分析Sch B對(duì)人肝癌細(xì)胞（H

2、epG2）凋亡、增殖及內(nèi)化阿霉素效應(yīng)的影響。采用超聲法制備SchB固體脂質(zhì)納米粒（Solid Lipid nanoparticles，SLN）。以外觀、粒徑、包封率為指標(biāo)，對(duì)處方和制備工藝進(jìn)行優(yōu)化并考察SchB-SLN混懸液和凍干品的穩(wěn)定性。用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）測(cè)定SchB-SLN包封率、載藥量及在30％甲醇、30%乙醇和30%丙二醇的pH6.8磷酸鹽

3、緩沖液（PBS）三種釋放介質(zhì)中的體外釋藥特性。
　　結(jié)果：Sch B對(duì)HepG2增殖的抑制作用隨藥物濃度增加而增強(qiáng)，IC50值為51.50μmol·L-1。用阿霉素(20μmol·L-1）處理 K562細(xì)胞和 pEC細(xì)胞作用4小時(shí)，藥物細(xì)胞內(nèi)化已近該濃度的極限。阿霉素20μmol·L-1單獨(dú)作用組熒光強(qiáng)度為58.30±3.93，而與25μmol·L-1Sch B合用組，增加到88.22±4.85；且隨Sch B濃度增加細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)

4、度顯著增加，但50μmol·L-1和100μmol·L-1Sch B組間無(wú)顯著差異。當(dāng)Sch B濃度為100μmol·L-1、150μmol·L-1和200μmol·L-1時(shí)，作用24小時(shí)，誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡率分別為5.56±1.14%、7.40±1.51%和10.27±1.26%。以單硬脂酸甘油酯為固體脂質(zhì)材料，卵磷脂和 F-68為混合乳化劑制得的SchB-SLN大小均勻，邊緣光滑呈球形，平均粒徑113.5nm，Zeta電位-23

5、.1mV，包封率91.19%。在三種釋放介質(zhì)中，4h內(nèi)均有一定程度的突釋，并顯示出一定的緩釋效應(yīng)，在含30%乙醇的PBS溶液中，72h累積釋藥量可達(dá)到86.8％。
　　結(jié)論：本研究所建立的促細(xì)胞內(nèi)化作用的阿霉素檢測(cè)方法未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，本法可快速、準(zhǔn)確的反映阿霉素細(xì)胞內(nèi)化的程度。低濃度的Sch B可明顯的促進(jìn)阿霉素細(xì)胞內(nèi)化，為篩選阿霉素的增敏藥物，建立合理的抗癌藥物聯(lián)合用藥方案提供了理論依據(jù)；高濃度的Sch B可抑制人肝癌細(xì)胞HepG