腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在膀胱癌中表達(dá)與臨床意義的研究.pdf

1、膀胱癌(bladder cancer，BCa)是泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在美國(guó)及大多數(shù)國(guó)家中，以移行細(xì)胞癌為主，占膀胱癌的90％以上。目前臨床治療策略的主要依據(jù)是腫瘤分期，肌層浸潤(rùn)性膀胱癌的首選治療方式為根治性膀胱切除術(shù)，而非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌一般推薦行經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)。但在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，部分非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者在術(shù)后短期內(nèi)即很快發(fā)生復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，二次手術(shù)病理表現(xiàn)為肌層浸潤(rùn)性。腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多階段、多步驟的復(fù)雜過(guò)程，而腫

2、瘤細(xì)胞所處的微環(huán)境在其中起重要作用，而巨噬細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境中的一種重要細(xì)胞成分。近年來(lái)研究顯示腫瘤組織局部浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞，即腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumor associated macrophages，TAMs），在腫瘤組織微環(huán)境中可以發(fā)生 M2型極化，從而發(fā)揮免疫抑制效應(yīng)，促進(jìn)瘤內(nèi)血管新生、腫瘤增殖、侵犯和轉(zhuǎn)移。本研究旨在探討TAMs與膀胱癌發(fā)生、復(fù)發(fā)、進(jìn)展的關(guān)系。
　　本研究分三部分：
　　第一部分M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在

3、預(yù)測(cè)非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌初次復(fù)發(fā)的關(guān)系
　　目的：探討 M2型 TAMs浸潤(rùn)程度及腫瘤臨床病理特征和非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌(non muscle-invasive bladder transitional cell cancer，NMIBC)術(shù)后初次復(fù)發(fā)之間的關(guān)系。
　　方法：回顧性分析我院診治的337例初發(fā)膀胱癌患者的臨床資料，以CD163為M2型TAMs分子標(biāo)記物，采用免疫組化檢測(cè)膀胱癌組織中TAMs浸潤(rùn)程度，采用χ2檢驗(yàn)，K

4、aplan-Meier法進(jìn)行生存分析并log-rank法檢驗(yàn)，Cox回歸模型分析TAMs浸潤(rùn)程度及其他膀胱癌復(fù)發(fā)危險(xiǎn)因素，如年齡、腫瘤大小、病理分級(jí)、腫瘤數(shù)目等對(duì)腫瘤術(shù)后初次復(fù)發(fā)的影響。
　　結(jié)果：在單因素分析中，癌間質(zhì) CD163重度浸潤(rùn)組術(shù)后復(fù)發(fā)率為36.2%，顯著高于輕、中度浸潤(rùn)組的16.2%（P=0.001）；腫瘤大于3cm和腫瘤小于3cm患者復(fù)發(fā)率分別為14.0%和28.4%，差異具有顯著性（P=0.001）；多發(fā)腫瘤和

5、單發(fā)腫瘤患者復(fù)發(fā)率分別為26.7%和14.9%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.046）；G1、G2、G3不同腫瘤病理分級(jí)復(fù)發(fā)率分別為25.0%、17.2%和22.1%，具有顯著性差異（P=0.008），多發(fā)非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者中，重度 CD163間質(zhì)浸潤(rùn)患者較輕中度更易復(fù)發(fā)（P=0.006），而單發(fā)患者中，腫瘤復(fù)發(fā)和間質(zhì)浸潤(rùn)程度無(wú)關(guān)（P=0.144）。腫瘤小于3cm患者中，復(fù)發(fā)和間質(zhì)浸潤(rùn)程度密切相關(guān)（P<0.01），而腫瘤大于3cm患者

6、中，復(fù)發(fā)和CD163間質(zhì)浸潤(rùn)程度無(wú)關(guān)（P=1.000）。腫瘤G1、G2級(jí)患者中，復(fù)發(fā)和CD163間質(zhì)浸潤(rùn)程度密切相關(guān)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.035），而在 G3患者中，與CD163間質(zhì)浸潤(rùn)程度無(wú)關(guān)（P=0.505）。Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析顯示 CD163+細(xì)胞重度浸潤(rùn)、腫瘤直徑>3cm、多發(fā)、高病理分級(jí)均為基層非浸潤(rùn)性膀胱癌復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素（P均<0.05）?；颊咝詣e、年齡、癌巢CD163細(xì)胞浸潤(rùn)程度無(wú)相關(guān)。
　　結(jié)論：膀胱癌間質(zhì)中

7、 CD163重度浸潤(rùn)者，膀胱癌術(shù)后更易復(fù)發(fā)，因此，癌間質(zhì)163浸潤(rùn)程度是非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌復(fù)發(fā)的潛在分子標(biāo)記物。此外，腫瘤病理分級(jí)、腫瘤大小、腫瘤是否單發(fā)均為非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　第二部分腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮生成因子和腫瘤微血管密
　　度在膀胱癌中的表達(dá)及臨床意義
　　目的：探討腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumor associated macrophages，TAMs）、血管內(nèi)皮生成因子（vasc

8、ular endothelial growth factor，VEGF）、腫瘤微血管密度（MVD）和膀胱癌發(fā)生、進(jìn)展的關(guān)系。
　　方法：以免疫組化方法檢測(cè)膀胱癌組織CD68+型TAMs浸潤(rùn)程度，腫瘤微血管密度（以CD34為標(biāo)記）及VEGF表達(dá)，每例標(biāo)本均選用膀胱癌中心組織，并選正常膀胱黏膜作為對(duì)照。
　　結(jié)果：39例正常膀胱黏膜僅有6例見(jiàn)CD68呈1級(jí)(15.4%)，其余均為0級(jí)(84.6%)；153例癌組織中CD68呈0級(jí)

9、者5例(3.2%)，1級(jí)33例(21.6%)，2級(jí)69例(45.1%)，3級(jí)46例(30.1%)，膀胱癌中，CD68+TAMs表達(dá)較正常膀胱粘膜顯著增多（P<0.01）。肌層浸潤(rùn)性膀胱癌和非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌比較，將CD68+TAMs表達(dá)程度0級(jí)、1級(jí)、2級(jí)合并，定為輕度浸潤(rùn)，CD68+TAMs表達(dá)程度3級(jí)定位重度浸潤(rùn)。輕度浸潤(rùn)患者中，T1期膀胱癌98例，T2-T4期膀胱癌9例；重度浸潤(rùn)患者中，T1膀胱癌31例，T2-T4期膀胱癌15例。

10、肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者中，CD68+TAMs浸潤(rùn)程度明顯升高，兩組比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。腫瘤微血管密度與膀胱癌中 CD68+TAMs浸潤(rùn)程度密切正相關(guān)（r值=0.414，P<0.01），VEGF和CD68+TAMs浸潤(rùn)程度也密切正相關(guān)（r值=0.333，P<0.01）。
　　結(jié)論：膀胱癌組織中TAMs的浸潤(rùn)程度、MVD和VEGF表達(dá)水平較正常膀胱組織顯著增高，提示TAMs可能參與膀胱癌的發(fā)生。CD68+TAMs的浸潤(rùn)

11、程度與腫瘤血管密度、VEGF表達(dá)水平和膀胱癌腫瘤分期密切相關(guān)，TAMs參與膀胱癌的進(jìn)展，TAMs浸潤(rùn)程度可以作為預(yù)后判斷的一項(xiàng)臨床指標(biāo)。
　　第三部分膀胱癌組織微環(huán)境中單核巨噬細(xì)胞的特性分析
　　目的：探討膀胱癌組織微環(huán)境中CD163+/CD206+單核巨噬細(xì)胞的表達(dá)特性。
　　方法：本部分通過(guò)收集膀胱癌組織樣本，利用熒光顯微鏡觀察腫瘤組織中CD163+細(xì)胞表達(dá)；通過(guò)流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)分析膀胱癌癌組織和癌旁正常組織中浸潤(rùn)

12、的CD45+CD14+CD163+細(xì)胞亞群表達(dá)情況，并分析與免疫和血管生成相關(guān)的分子表達(dá)情況；利用小鼠膀胱癌細(xì)胞株MB49皮下接種C57/BL6小鼠，構(gòu)建荷瘤小鼠模型，以流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)不同時(shí)期荷瘤小鼠 CD11b+F4/80+CD206+單核巨噬細(xì)胞表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。
　　結(jié)果：腫瘤癌灶浸潤(rùn)的CD45+CD14+CD163+單核巨噬細(xì)胞亞群比例較癌旁組織顯著增高，兩者具有顯著性差異；無(wú)論癌組織還是癌旁組織，CD45+CD14+CD