廣金錢草種質(zhì)資源評價與遺傳多樣性分析.pdf

1、廣金錢草為豆科植物廣金錢草Desmodium styracifolium(Osb.) Merr.的干燥地上部分[1]?！稁X南采藥錄》中以“馬蹄草”作為藥材名載入，是一種廣泛使用的大宗中藥材，根據(jù)文獻(xiàn)的記載[2]，廣金錢草主要生長、種植分布于廣東、廣西、云南、海南等南方地區(qū)，在廣東、廣西又常被稱為金錢草、馬蹄草、假花生等。廣金錢草主要功效清熱祛濕、利水通淋，且具有排石的功效，常用于治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石、膽囊炎、膽結(jié)石等疾病[3]。
　　

2、通過對廣東省、廣西壯族自治區(qū)廣金錢草種植情況進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，廣東、廣西兩地均有大面積種植廣金錢草的傳統(tǒng)，形成相對穩(wěn)定的栽培品種。其中，通過人工培育，種植規(guī)模最大的地區(qū)是廣西桂林市臨桂縣，年產(chǎn)量達(dá)2000噸，為目前產(chǎn)量最大的廣金錢草種植地。
　　運(yùn)用HPLC-UV對廣金錢草中五種黃酮類成分（夏佛塔苷、Vicenin2、Vicenin3、異葒草素、異牡荊苷）的含量進(jìn)行測定分析，所采集的廣金錢草樣本所含的夏佛塔苷均高于藥典標(biāo)準(zhǔn)，人工栽培的

3、廣金錢草所含的這五種黃酮類成分均高于野生及半野生藥材，且人工栽培的廣金錢草質(zhì)量較為穩(wěn)定容易控制。
　　采用HPLC對23份不同采收時間、不同產(chǎn)地的廣金錢草藥材進(jìn)行分析，建立HPLC指紋圖譜，確定共有峰14個，通過與化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品對照，確定5個主要化學(xué)成分。使用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2004A)對樣品色譜圖進(jìn)行分析，不同產(chǎn)地及采收時間的廣金錢草HPLC圖譜與對照圖譜的相似度在0.952-0.992之間。運(yùn)用主成分分析方法對23

4、份藥材樣品共有峰的峰面積進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，第1和第2主成分因子的累積貢獻(xiàn)率為88％，其中在共有峰中第6、8、11、12、4、14、3號峰對主成分因子1貢獻(xiàn)較大；1號峰對主成分因子2貢獻(xiàn)最大。采用SPSS軟件，采用系統(tǒng)聚類WARD法，Euclidean距離，卡方度量，平方Euclidean距離聚類，結(jié)果顯示G8、G9、G10、G15、G16、G23為一類，其余樣品為另一類，與主成分分析結(jié)果一致，另一個大類群中， G7、G11、G21聚在一起，

5、 G17、G18、G19、G20聚在一類，它們均處于對主成分因子1和2負(fù)相關(guān)，但接近中值的位置。G4、G5、G6號樣品距離較近，與主成分分析結(jié)果一致。
　　應(yīng)用 ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對廣東省、廣西壯族自治區(qū)共15個產(chǎn)地的廣金錢草遺傳多樣性以及親緣性關(guān)系進(jìn)行分析，從ISSR通用引物中選取7條合適的引物對廣金錢草基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，共擴(kuò)增出51條清晰的條帶，多樣性條帶為41條，使用Popgene1.32軟件對擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行分析， Sh

6、annon多樣性指數(shù)(I)為0.3，Nei’s遺傳多樣性指數(shù)(H)為0.2464，居群間的遺傳分化系數(shù)(GST)為0.1238，基因流(Nm)為3.5397，以上指數(shù)顯示廣東、廣西兩地栽培以及野生廣金錢草具有較高的遺傳多樣性。根據(jù)Nes’s遺傳相似度利用 NTsys軟件進(jìn)行 UPGMA進(jìn)行聚類分析。結(jié)果顯示，采集于廣西壯族自治區(qū)桂林市臨桂縣地區(qū)的樣品聚為一類，柳州市融安縣泗頂鎮(zhèn)三坡村與來賓市吉林村的樣品聚為一類，再與桂林市臨桂區(qū)的樣品聚