糖皮質(zhì)激素受體與脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞參與神經(jīng)病理性疼痛的機(jī)制研究.pdf

1、背景:
　　神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性損害和功能障礙所激發(fā)或引起的疼痛稱之為神經(jīng)病理性疼痛（Neuropathic Pain，NPP）。神經(jīng)病理性疼痛是一種慢性疼痛，對(duì)人們的影響具有長(zhǎng)期性和破壞性，并伴隨痛覺(jué)范圍擴(kuò)大、敏感性增強(qiáng)等特點(diǎn)，但目前對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的治療仍然缺乏有效的方法。因此，對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的機(jī)制研究顯得尤為重要。
　　當(dāng)機(jī)體受到如創(chuàng)傷、感染等刺激時(shí)，外周傷害性感受器可將其經(jīng)外周神經(jīng)傳入背根神經(jīng)節(jié)至脊髓背角，進(jìn)而交叉上行至

2、大腦皮層，產(chǎn)生疼痛的感覺(jué)。在此過(guò)程中存在多種電化學(xué)信號(hào)，如各種炎性介質(zhì)、神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，最終導(dǎo)致中樞敏化，痛閾降低，痛覺(jué)敏感。既往對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的研究多集中于外周神經(jīng)系統(tǒng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)元敏感化、突觸重塑等作用，而對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞活化的研究較少。
　　近年來(lái)諸多研究表明，在外周神經(jīng)損傷模型、外周炎性疼痛模型以及癌痛模型中，脊髓背角膠質(zhì)細(xì)胞均有不同程度的活化，表明脊髓膠質(zhì)細(xì)胞的活化在神經(jīng)病理性疼痛中占有至關(guān)重要的地位。糖皮質(zhì)激素是正

3、常人體內(nèi)的重要生理物質(zhì)，在機(jī)體中發(fā)揮廣泛作用，包括抗炎、抗休克、抗毒等。糖皮質(zhì)激素受體GR(Glucocorticoid Receptor)是一種激素依賴性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。GR廣泛表達(dá)于外周神經(jīng)系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，并且GR在傷害性信息傳遞及中樞敏化過(guò)程中起著重要作用，但GR在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用存有爭(zhēng)議。在外周神經(jīng)損傷模型中，GR及脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞是如何發(fā)揮作用的，兩者之間是否存在關(guān)系，都需要深入研究。
　　本研究通過(guò)建立坐骨神經(jīng)分

4、支選擇性損傷（SNI）模型，研究大鼠脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞的活化狀態(tài)及GR的表達(dá)情況。蛛網(wǎng)膜下腔注射GR的激動(dòng)劑地塞米松（Dexamethasone、Dex）、GR的拮抗劑RU38486及脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞的抑制劑氟代檸檬酸（Fluorocitrate、FC）后，觀察大鼠的痛行為變化，并檢測(cè)脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞OX42及GR的表達(dá)變化，從而探討外周神經(jīng)損傷所致神經(jīng)病理性疼痛的可能發(fā)生機(jī)制，對(duì)其治療提供理論依據(jù)。
　　目的:
　　建立S

5、NI大鼠神經(jīng)病理性疼痛模型，觀察SNI大鼠痛行為的變化和脊髓GR蛋白表達(dá)水平；通過(guò)蛛網(wǎng)膜下腔注射Dex、RU38486，分別激動(dòng)或抑制糖皮質(zhì)激素受體GR的表達(dá)，檢測(cè)SNI大鼠痛行為的變化及Western-blot中GR的表達(dá)變化，進(jìn)一步驗(yàn)證GR在神經(jīng)病理性疼痛中的參與作用。
　　通過(guò)免疫熒光雙標(biāo)對(duì) SNI大鼠脊髓中GR及小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行定位，并蛛網(wǎng)膜下腔注射小膠質(zhì)細(xì)胞的抑制劑FC，觀察SNI大鼠痛行為的變化，并探究神經(jīng)病理性疼痛中G

6、R與脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞的關(guān)系。
　　材料和方法:
　　1.分組：90只雄性SD大鼠隨機(jī)分為9組：模型組（SNI組，n=24）和假手術(shù)組（Sham組，n=24）；SNI+Dex組(n=6）、SNI+NS組（n=6）和SNI+RU38486組（n=6），RU38486組（n=6）和 NS組（n=6）；SNI+FC組(n=6）和SNI+NS組（n=6）。
　　2.SNI模型的建立：大鼠稱重后腹腔注射10％水合氯醛麻醉。切開(kāi)皮膚后

7、逐層分離，充分暴露坐骨神經(jīng)及其分支，選擇性結(jié)扎脛神經(jīng)和腓總神經(jīng)，并剪斷去除部分神經(jīng)干。Sham組只暴露不結(jié)扎神經(jīng)分支。
　　3.蛛網(wǎng)膜下腔置管：在L5-L6關(guān)節(jié)突結(jié)合處刺入硬脊膜內(nèi)，輕夾PE10導(dǎo)管前端將導(dǎo)管向上置入，導(dǎo)管內(nèi)有清亮的腦脊液流出或出現(xiàn)甩尾、抖動(dòng)反射，表明蛛網(wǎng)膜下腔置管成功。
　　4.痛行為測(cè)定：SNI組和Sham組均在術(shù)前1天、術(shù)后3、7、14、21天測(cè)定50%縮足閾值。SNI+Dex組、SNI+NS組和SNI

8、+RU38486組測(cè)定術(shù)前1天、術(shù)后3、7、9至13天的50%縮足閾值；RU38486組和NS組測(cè)定置管前1天、置管后5至10天的50%縮足閾值。SNI+FC組和SNI+NS組于術(shù)前1天、術(shù)后3、7、9至13天分別測(cè)定兩組大鼠的50%縮足閾值。
　　5.免疫熒光雙標(biāo)：于術(shù)后14天檢測(cè)SNI組和Sham組脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞OX42與糖皮質(zhì)激素受體GR的表達(dá)變化及共表達(dá)情況。檢測(cè)SNI+FC組和SNI+NS組術(shù)后13天GR的表達(dá)情況。

9、r>　　6.Western-blot：檢測(cè)SNI組和Sham組術(shù)后14天及SNI+Dex組、SNI+NS組和SNI+RU38486組術(shù)后13天脊髓GR蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.與Sham組相比，SNI組大鼠術(shù)后50%縮足閾值顯著降低（P<0.05）；Western-blot顯示，SNI組大鼠術(shù)后GR的蛋白水平顯著降低（P<0.05）。
　　2.蛛網(wǎng)膜下腔注射Dex后SNI大鼠的痛行為得到明顯緩解，與SNI+

10、NS組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而給予RU38486不會(huì)進(jìn)一步加劇疼痛（P>0.05）。在正常大鼠體內(nèi)給予RU38486可使50%縮足閾值降低（P<0.05），導(dǎo)致疼痛。與SNI+NS組相比，Western-blot顯示：SNI+Dex組大鼠術(shù)后GR的蛋白水平顯著增高（P<0.05），SNI+RU38486組顯著降低（P<0.05）。
　　3.免疫熒光顯示，術(shù)后SNI組大鼠GR的表達(dá)減低，OX42表達(dá)增高，與Sham

11、組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；且GR與脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞共表達(dá)。
　　4.與SNI+NS組相比，SNI+FC組大鼠術(shù)后50%縮足閾值顯著增加（P<0.05）；免疫熒光顯示，術(shù)后SNI+FC組大鼠OX42表達(dá)降低，GR的表達(dá)增加，與SNI+NS組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.糖皮質(zhì)激素受體激活后可緩解坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷大鼠的痛行為，可能在神經(jīng)病理性疼痛的調(diào)控中發(fā)揮作用。