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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:通過(guò)中藥化學(xué)成分分離,從理化鑒別、化學(xué)成分質(zhì)譜行為及其特征圖譜研究等方面,探究蘋(píng)果花粉化學(xué)成分;通過(guò)對(duì)三批秦冠花粉、嘎啦花粉、紅富士花粉的性狀鑒別、形態(tài)鑒別、薄層鑒別、檢查及含量測(cè)定等方面的研究,建立蘋(píng)果花粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);從而達(dá)到對(duì)蘋(píng)果花粉質(zhì)控的目的。通過(guò)對(duì)a-淀粉酶的抑制作用研究,初步開(kāi)展蘋(píng)果花粉藥效學(xué)研究。
方法:以中藥學(xué)、中藥化學(xué)、分析化學(xué)、中藥藥理學(xué)等為指導(dǎo),開(kāi)展了本課題研究:(1)采用理化鑒別的方法確定花粉中可能
2、含有的化學(xué)成分種類;(2)采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MSn)技術(shù),對(duì)花粉提取物進(jìn)行化學(xué)成分分析研究以及各花粉化學(xué)成分之間對(duì)比研究;(3)采用薄層方法確定花粉中可能含有的有效成分;(4)根據(jù)《中國(guó)藥典》2010版附錄方法檢查花粉中的水分、總灰分、酸不溶灰分、浸出物及有害元素含量;(5)采用苯酚-濃硫酸顯色和硝酸鋁顯色方法,分別對(duì)花粉中總多糖、總黃酮的含量進(jìn)行研究;(6)采用冷藏留樣觀察法,進(jìn)行性狀、鑒別、檢查、微生物限度等項(xiàng)目
3、的檢查,考察該藥材的穩(wěn)定性,以確定有效期;(7)采用體外活性實(shí)驗(yàn),模擬對(duì)人體a-淀粉酶的抑制作用,從而確定花粉粗提物具有抑制a-淀粉酶,抑制血糖的作用。
成果:(1)通過(guò)化學(xué)成分理化鑒別,證實(shí)了蘋(píng)果花粉中含有甾體類、三萜類、油脂、鞣質(zhì)、有機(jī)酸類、總黃酮類、蒽醌類、糖和苷、皂苷、氨基酸、蛋白質(zhì)等11種化學(xué)成分,其中總黃酮類、蒽醌類、糖和苷、鞣質(zhì)、有機(jī)酸類、氨基酸、蛋白質(zhì)這些成分含量較多,甾體類、三萜類、油脂(非揮發(fā)性)、皂苷類這
4、些成分含量少,可能不含有總生物堿類、香豆素類和強(qiáng)心苷類成分。
(2)對(duì)蘋(píng)果花粉化學(xué)成分質(zhì)譜行為及其特征圖譜研究(HPLC-MSn),從蘋(píng)果花粉提取物中得到26種成分,分別為:甘露醇、戊二酸、半乳糖醇、氯化錦葵色素、葡萄糖酸、2,3-二巰基丁二酸、異戊巴比妥、苦馬酸葡萄糖甙、2-羥基異丁酸、亞油酸、3-羥基-3-甲基谷氨、7-甲基鳥(niǎo)嘌呤、5-羥基吲哚乙酸、L-色胺酸、綠原酸、DL-3-苯基乳酸、L-(-)-蘋(píng)果酸、根皮苷、間羥基
5、肉桂酸、異鼠李素-3-O-葡萄糖苷、丁香亭-3-O-半乳糖苷、花生四烯酸、鼠李素、堪非醇3-O-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-D-木糖甙、Isorhamnetin-3-Glucoside-4'-Glucoside和Isorhamnetin-3-Galactoside-6"-Rhamnoside。首次發(fā)現(xiàn)19種化學(xué)成分,其余7種已有文獻(xiàn)報(bào)道。其中糖類和黃酮類成分為主要成分。
質(zhì)譜分析對(duì)比研究,結(jié)果表明,秦冠花粉、紅富士花粉和嘎啦花粉三
6、種蘋(píng)果花粉含有比較多的共同成分,均檢出葡萄糖酸、綠原酸、根皮苷和丁香亭-3-O-半乳糖苷,為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定奠定基礎(chǔ)。
(3)薄層鑒別結(jié)果表明,供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,有與綠原酸和山柰酚顯共同特征的顏色斑點(diǎn)。
(4)檢查結(jié)果表明,蘋(píng)果花粉水分不得過(guò)12.0%;總灰分不得過(guò)11.0%;酸不溶灰分不得過(guò)5.0%。浸出物結(jié)果表明,照水溶性浸出物測(cè)定法(附錄XA)項(xiàng)下熱浸法測(cè)定,用水作溶劑,不得少于22.0%;
7、照醇溶性浸出物測(cè)定法(附錄XA)項(xiàng)下熱浸法測(cè)定,用50%乙醇作溶劑,不得少于29.0%;照醇溶性浸出物測(cè)定法(附錄XA)項(xiàng)下熱浸法測(cè)定,用90%乙醇作溶劑,不得少于24.0%。有害元素測(cè)定結(jié)果表明,鉛不得過(guò)百萬(wàn)分之五;鎘不得過(guò)千萬(wàn)分之三;汞不得過(guò)千萬(wàn)分之二;銅不得過(guò)百萬(wàn)分之二十。
(5)含量測(cè)定結(jié)果表明,采用苯酚-濃硫酸分析法,不同種類蘋(píng)果花粉總多糖含量為13.03~23.17 mg·g-1之間,本品按干燥品計(jì)算,含多糖以葡萄
8、糖(C6H12O6)計(jì),不得少于1.0%。對(duì)照品在0.006 mg~0.143 mg范圍內(nèi),吸光度與濃度呈良好的線性關(guān)系,平均回收率96.22%,RSD=0.71%(n=9),表明該方法具有良好的專屬性、線性、精密度、重復(fù)性和準(zhǔn)確度,適用于花粉中總多糖的含量測(cè)定。采用硝酸鋁分析法,不同種類蘋(píng)果花粉含量在13.56~21.21 mg·g-1之間,本品按干燥品計(jì)算,含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計(jì),不得少于1.0%。對(duì)照品溶液在0.0
9、04~0.096mg·mL-1范圍內(nèi),吸光度與濃度呈良好的線性關(guān)系,平均回收率99.97%,RSD(%)=3.46(n=9),表明該方法具有良好的專屬性、線性、精密度、重復(fù)性和準(zhǔn)確度,適用于花粉中總黃酮的含量測(cè)定。
(6)分別考察了6個(gè)月的三批蘋(píng)果花粉樣品,經(jīng)檢驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)均符合注冊(cè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案和《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄項(xiàng)下規(guī)定,繼續(xù)考察穩(wěn)定性至一年,以確定有效期。
(7)體外藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明,花粉樣品濃度和抑制
10、率呈正相關(guān),隨著濃度的增大,抑制率增加,濃度為12.5 mg·ml-1左右時(shí),抑制率接近100%。拜糖平濃度和抑制率呈正相關(guān),隨著濃度的增大,抑制率增加,濃度達(dá)到0.687mg·ml-1左右時(shí),抑制率達(dá)到60%,濃度增加,抑制率也不再增加。
結(jié)論:本研究從理化鑒別和多級(jí)質(zhì)譜行為方面對(duì)蘋(píng)果花粉進(jìn)行了化學(xué)研究,為蘋(píng)果花粉的化學(xué)成分進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ);建立了蘋(píng)果花粉質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)行了初步穩(wěn)定性試驗(yàn),達(dá)到對(duì)花粉質(zhì)控的目的。開(kāi)展了蘋(píng)
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