健康嬰幼兒攜帶艱難梭菌的流行病學(xué)特征及跟蹤調(diào)查.pdf

1、目的：艱難梭菌（Clostridiumdifficile,CD）是腸道內(nèi)一種專性厭氧的芽孢桿菌，有產(chǎn)毒株和非產(chǎn)毒株，均能夠在健康人體內(nèi)無癥狀定植。在受到某些因素影響如抗生素的長期應(yīng)用或者免疫抑制劑的使用等使腸道菌群環(huán)境發(fā)生改變而引發(fā)艱難梭菌感染（Clostridiumdifficileinfection,CDI），繼而發(fā)生艱難梭菌相關(guān)性腹瀉（Clostridiumdifficileassociateddiarrhea,CDAD）等癥狀。

2、CD在健康嬰幼兒體內(nèi)能夠長期的無癥狀定植，定植率在各個國家和地區(qū)變異性較大，且各地區(qū)定植株的型別及影響定植的因素也各不相同。本地區(qū)關(guān)于這方面的流行病學(xué)資料相對有所欠缺，本研究擬對河北邯鄲地區(qū)0-3周歲的健康嬰幼兒腸道內(nèi)CD的定植情況及影響其定植的因素進行流行病學(xué)調(diào)查，同時對若干嬰兒進行為期12個月的跟蹤調(diào)查，了解其體內(nèi)CD定植的動態(tài)情況及發(fā)生變化的影響因素。使河北地區(qū)健康嬰幼兒體內(nèi)CD定植的流行病學(xué)資料更加豐富，為臨床制定預(yù)防和治療疾病

3、策略提供證據(jù)。
　　方法：
　　1、從2014年10月至2015年12月，共收集河北邯鄲地區(qū)0-3周歲以內(nèi)健康嬰幼兒糞便標本1098份，每人收取一次，并記錄每個嬰幼兒的基本資料。同時，對29名嬰兒從出生至12月齡進行為期1年的跟蹤調(diào)查，分別在出生時、1周、2周、3周、1月、2月、3月、4月、5月、6月、7月、8月、9月、10月、11月、12月等16個時間點收取糞便標本，記錄每次當時的資料情況。
　　2、將收集的糞便標本

4、應(yīng)用芽孢富集法進行CD的分離培養(yǎng)，并對疑似菌落進行鑒定。將鑒定得到的CD菌株按照細菌基因組DNA試劑盒的方法提取DNA，后采用多重PCR的方法檢測毒素A、B及二元毒素A、B基因，包括tcdA、tcdB、cdtA、cdtB、16SrDNA。
　　3、將提取的菌株DNA進行核糖體分型，分型結(jié)果用QuantityOne軟件做比對分析。分出的型別跟標準菌株類型比較并命名。
　　4、將一次性標本所得的CD采用瓊脂稀釋法進行藥物敏感實驗

5、，共選擇了非達霉素、萬古霉素、甲硝唑、利福平、利福昔明、紅霉素、四環(huán)素、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢他啶、頭孢曲松、美羅培南、氯霉素、克林霉素等14種抗生素，分別測定其MIC值（最低抑菌濃度）。
　　結(jié)果：
　　1、1098位0-3歲健康嬰幼兒的糞便標本中共有250份標本分離培養(yǎng)出250株艱難梭菌，總攜帶率為22.77％（250/1098），其中產(chǎn)毒株攜帶率為12.57%（138/1098），在所有產(chǎn)毒株中有1株為tcdA+t

6、cdB+cdtA+cdtB+，其它均為tcdA+tcdB+cdtA-cdtB-。所有菌株通過核糖體分型共分出15種不同的核糖體型別，型別中數(shù)量最多為HB-3型，占所有菌株的19.6%，其次是HB9型（14%）、HB1型（13.6%）、HB2型（10.8%）和HB5（10.4）。分析結(jié)果顯示母親的懷孕周期、近期應(yīng)用抗生素和近期住院史可能是健康嬰幼兒體內(nèi)艱難梭菌定植的影響因素。本次研究中未發(fā)現(xiàn)高產(chǎn)毒株型別027和078型。
　　2、抗

7、生素耐藥性分析中，從250株艱難梭菌對14種抗生素的MIC值測定結(jié)果可見，所有實驗菌株對萬古霉素、甲硝唑和非達霉素三種藥均高度敏感，沒有耐藥菌株；對美羅培南和氯霉素的耐藥率比較低，分別為2%和6.8%；對其他幾種藥物耐藥率均較高，由高到低依次為克林霉素（99.2%）、頭孢他啶（96.8%）、紅霉素（94.4%）、環(huán)丙沙星(88%)、利福平（63.2%）、利福昔明（63.2%）、四環(huán)素（54.4%）、左氧氟沙星（51.6%）、頭孢曲松（4

8、4.8%）。
　　3、跟蹤調(diào)查的結(jié)果，29位嬰兒共收集437份標本，其中20個嬰兒的糞便標本中發(fā)現(xiàn)有CD的定植，定植率為69%（20/29）。有產(chǎn)毒株定植的有15人，定植率為75%（15/20）。其中，111份陽性標本中分離出79株產(chǎn)毒艱難梭菌，所有分離菌株的產(chǎn)毒株定植率為71.2%（79/111）。定植CD的嬰兒中有4個在出生后1個月內(nèi)定植CD，其它16個均為1月齡之后才有CD的定植。且在定植者中有些定植是連續(xù)的（4、5、7、8

9、、12號），有的是間斷性的（1、2、3、6、9、10、11、13、16、17、18、19號），還有個別是一過性的定植（14、15、20號嬰兒）。
　　4、在跟蹤研究中，111株艱難梭菌共分為8種核糖體型，其中HB9（n=14）和HB2（n=18）為非產(chǎn)毒型，其它幾種型別HB42（n=26）、HB1（n=16）、HB52（n=12）、HB3（n=15）、HB6（n=5）、HB5（n=5）均為產(chǎn)毒型別?；旧厦總€嬰兒體內(nèi)定植的艱難梭菌

10、型別前后一致，其中8號在2月齡時糞便標本中分離出CD型別為HB3型，之后分離出的菌株型別為HB-42型；11號嬰兒則先后分離出HB1型和HB9型菌株，即之前分離出CD產(chǎn)毒株，后有非產(chǎn)毒CD的定植；15號有HB52型和HB1型菌株的先后定植；16號先后分離出HB1型和HB3型的艱難梭菌菌株。
　　結(jié)論：
　　1、本次研究中河北邯鄲地區(qū)0-3周歲健康嬰幼兒的艱難梭菌總攜帶率略低于國外相關(guān)報道，而產(chǎn)毒株攜帶率與國內(nèi)報道結(jié)果相似。<

11、br>　　2、分析結(jié)果顯示母親的懷孕周期、近期應(yīng)用抗生素和近期住院史可能是健康嬰幼兒體內(nèi)艱難梭菌定植的影響因素，與國內(nèi)外的報道結(jié)果相似。收集菌株的核糖體分型結(jié)果顯示，優(yōu)勢型別為HB3和HB9。而且本次分離的菌株型別中，有些型別同省內(nèi)之前分離出的住院兒童和成人的菌株型別相同，提示艱難梭菌在這些個體間傳播的可能性。
　　3、一次性標本分離的菌株對14種抗生素的耐藥情況結(jié)果顯示，與國內(nèi)的幾篇報道相比利福霉素類的耐藥率相對較高，可能與收集

12、標本所在地應(yīng)用抗生素情況相關(guān)。其它幾種藥物的耐藥情況與國內(nèi)報道的大多相似。
　　4、在跟蹤調(diào)查的嬰兒體內(nèi)CD的定植率與第一部分中0-12月齡年齡段收取一次性標本的CD定植率相比較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明只收取一次糞便標本會降低整體的CD定植率。隨著年齡的增長，嬰兒的CD定植率有上升的趨勢，且可能與添加輔食時間有關(guān)，而具體關(guān)系如何還需進一步研究證明。產(chǎn)毒型CD在嬰兒體內(nèi)長期定植的型別中占優(yōu)勢，且有可能是以后成年階段發(fā)生CDI的一個