
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
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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:建立急性放射性心臟損傷( radiation induced heart damage, RIHD)大鼠模型,觀察 RIHD急性期心肌組織病理學(xué)變化,探討其發(fā)生機(jī)制并研究吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)對(duì)RIHD的保護(hù)作用及作用機(jī)制。
方法:成年雄性Sprague-Dawlay(SD)大鼠21只隨機(jī)分為三組(n=7):空白對(duì)照組(Control組)、單純照射組(I
2、rradiation,IR組)和PDTC+照射組(PDTC+IR組)。
1.照射處理:?jiǎn)渭冋丈浣M及 PDTC+照射組大鼠接受心前區(qū)局部20.0 Gy單次劑量照射,直線加速器下6 MV-X線,2.0 x2.0 cm大小射野,深度1.5 cm,劑量率1.8 Gy/min;
2.PDTC處理:照射前大鼠稱重,計(jì)算PDTC給藥量(120mg/kg), PDTC+照射組大鼠在照射前30min腹腔注射PDTC,之后每天同一時(shí)間給
3、藥1次,直至照射后第14天。同時(shí)空白對(duì)照組及單純照射組每天給予相應(yīng)體積生理鹽水腹腔注射。
3.形態(tài)學(xué)觀察:放射線照射后第14天處死動(dòng)物進(jìn)行心肌組織病理切片染色。蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin, HE)染色觀察大鼠心肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及細(xì)胞間質(zhì)形態(tài)學(xué)改變。Masson染色觀察心肌膠原纖維表達(dá)及分布情況,應(yīng)用軟件定量分析以評(píng)價(jià)心肌纖維化程度。
4.生物化學(xué)檢測(cè):放射線照射后第14天處死動(dòng)物進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫
4、印記法(Western blot)及實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)法分別檢測(cè)大鼠心肌組織核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)家族成員 P50、P65,低氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor1α,HIF-1α)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth
5、factor,CTGF)、Ⅰ型膠原(collagen typeⅠ,COL-1)蛋白及mRNA表達(dá)量的變化。
結(jié)果:
1.形態(tài)學(xué)結(jié)果:(1)石蠟切片HE染色:?jiǎn)渭冋丈浣M與空白對(duì)照組相比,心肌細(xì)胞水腫明顯,排列紊亂,部分心肌細(xì)胞斷裂;心肌細(xì)胞核輕度固縮,核染色加深,少量異形細(xì)胞核,心肌間質(zhì)可見大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),成纖維細(xì)胞增多。PDTC藥物干預(yù)后再進(jìn)行照射上述損傷變化均得到改善。(2)Masson染色及定量分析:?jiǎn)渭冋丈浣M
6、膠原纖維被染為藍(lán)綠色,廣泛分布于心肌細(xì)胞間質(zhì),較對(duì)照組明顯增多,正常心肌細(xì)胞排列紊亂,有被膠原纖維替代的趨勢(shì)。定量分析單純照射組心肌膠原容積分?jǐn)?shù)( collagen volume fraction, CVF)明顯高于對(duì)照組(P<0.05);PDTC處理后再照射CVF下降(P<0.05)。
2.Western blot和qPCR結(jié)果:(1)心肌組織P50、P65蛋白表達(dá)及mRNA水平單純照射組較對(duì)照組均升高(均 P<0.05),
7、PDTC+照射組較單純照射組下降(均P<0.05);(2)心肌組織HIF-1α蛋白濃度及mRNA水平單純照射組較對(duì)照組均升高(均P<0.05),PDTC+照射組較單純照射組下降(均P<0.05);(3)心肌組織CTGF蛋白濃度及mRNA水平單純照射組較對(duì)照組均升高(均 P<0.05),PDTC+照射組較單純照射組均為有下降趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05);(4)心肌組織COL-1蛋白單純照射組較對(duì)照組升高(P<0.05), P
8、DTC+照射組較單純照射組下降(P<0.05);COL-1 mRNA水平單純照射組較對(duì)照組升高(P<0.05),PDTC+照射組較單純照射組有下降趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
結(jié)論:
1.放射線照射早期可引起心肌細(xì)胞炎癥,啟動(dòng)NF-κB炎癥反應(yīng)調(diào)控通路,組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為心肌細(xì)胞水腫,細(xì)胞間質(zhì)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);
2.放射線照射早期可引起心肌細(xì)胞纖維化,組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為細(xì)胞間質(zhì)成纖維細(xì)胞增多,膠原
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