萬壽菊殘渣的成分分離與抗癌活性研究.pdf

1、萬壽菊，為菊科萬壽菊屬中最有名的一類植物，主要被用于提取葉黃素。本課題以萬壽菊殘渣為研究對象，采用離線二維制備型高效液相色譜法，結(jié)合實(shí)時無標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)，從提取工藝的選擇、二維正交高效液相色譜方法的建立、活性單體化合物的制備及抗癌活性藥效學(xué)評價這四個方面展開研究，旨在建立一種生物活性指導(dǎo)下的活性單體化合物的分離方法，為新藥開發(fā)提供有價值的有效信息，奠定一定的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　通過考察影響萬壽菊提取效果的因素，如提取次數(shù)、提取時間、

2、提取溫度和料液比等，對萬壽菊提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，從而得到最適合萬壽菊殘渣提取的工藝條件：以乙醇為溶劑，料液比1：5，60℃下回流提取3次，每次120 min。
　　對按最佳工藝條件提取得到的萬壽菊殘渣醇提物進(jìn)行一維液相色譜分離。運(yùn)用正相Innoval silica柱和反相DAISO C18進(jìn)行初步的一維分離分析，最終選取了正相的分離方式。在一維制備中，共得到了9個粗組分，為后續(xù)的二維分離起到了提高效率的作用。在分離過程中結(jié)合實(shí)時無標(biāo)

3、記細(xì)胞分析技術(shù)，篩選得到3個抗腫瘤活性組分。
　　進(jìn)一步對3個活性組分進(jìn)行二維色譜分離。通過考察不同色譜柱對樣品的分離情況，從而建立了一個由Innoval silica柱和Diol柱所組成的離線二維色譜分離系統(tǒng)。該系統(tǒng)對萬壽菊殘渣中的黃酮類物質(zhì)呈現(xiàn)出較好的保留和選擇性。在二維制備中，得到了8個化合物，純度都在96％以上。結(jié)合核磁數(shù)據(jù)對其進(jìn)行表征，結(jié)果顯示，主要為黃酮類以及有機(jī)酸類化合物，其中化合物3（6-羥基山萘酚）是首次從萬壽菊

4、屬植物中被分離得到。
　　對分離得到的化合物進(jìn)行抗癌活性篩選，結(jié)果表明，化合物2和3對于A549和Hep-G2細(xì)胞均有一定的抑制作用，化合物4和5能顯著抑制A549細(xì)胞活性，而對Hep-G2細(xì)胞的抑制作用不明顯。對于得率最高的化合物5（槲皮萬壽菊素）進(jìn)行進(jìn)一步的安全性評價和體內(nèi)活性驗(yàn)證研究。急毒試驗(yàn)結(jié)果顯示，槲皮萬壽菊素在給藥劑量0.63 g/kg-10.0 g/kg范圍內(nèi)，小鼠生活狀態(tài)良好，無死亡現(xiàn)象，表明該活性成分安全有效。采

5、用Lewis肺癌和H22肝癌小鼠模型，通過考察對小鼠的常規(guī)生理指標(biāo)的影響、對實(shí)體瘤的抑制作用來評價槲皮萬壽菊素的抗癌活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在給藥劑量為180 mg/kg、服藥天數(shù)為10天時，其對小鼠Lewis肺癌和H22肝癌模型具有一定的療效，抑瘤率分別達(dá)到47.72%和46.27%，接近于陽性藥物環(huán)磷酰胺的療效。
　　總之，本課題中所構(gòu)建生物活性指導(dǎo)下的離線二維色譜分離系統(tǒng)在快速、有效地獲得萬壽菊殘渣中的抗癌活性化合物上起到了至關(guān)