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文檔簡介
1、目的:
近年來潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)在我國發(fā)病率明顯上升,UC發(fā)病基礎(chǔ)尚有待于進(jìn)一步的研究。在UC的病理生理過程中,腸粘膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞通過蛋白C(protein C, PC)途徑對腸道炎癥和凝血機(jī)制進(jìn)行調(diào)節(jié)。同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)是一種含硫氨基酸,通過抑制PC途徑中有關(guān)蛋白的表達(dá),降低PC抗凝和抗炎作用,在心腦血管系統(tǒng)疾病的血栓形成過程中具有重要影響。由于IB
2、D患者腸道黏膜中Hcy水平較高,腸道黏膜微血栓形成在UC病理過程中具有重要作用,Hcy是否通過影響腸道黏膜中微血栓形成過程的相關(guān)因素,加重結(jié)腸炎癥反應(yīng)目前尚不明確。因此,本研究通過檢測Hcy對實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(soluable thrombomodulin, sTM)、PC、游離蛋白S(free protein S, fPS)水平和內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(endothelial protein C receptor
3、, EPCR)表達(dá)的影響,探討Hcy在UC發(fā)病機(jī)制中的作用。
方法:
采用2,4,6-三硝酸苯磺酸(trinitro-benzene-sulfonic acid, TNBS)灌腸制備大鼠結(jié)腸炎模型。對照組以等體積的生理鹽水(NS)灌腸。SD大鼠分為4組,A組(正常對照組):生理鹽水灌腸+生理鹽水皮下注射;B組(正常對照+Hcy注射組):生理鹽水灌腸+Hcy皮下注射;C組(TNBS模型組):TNBS/乙醇溶液灌腸+生理
4、鹽水皮下注射;D組(TNBS模型+Hcy注射):TNBS/乙醇溶液灌腸+Hcy皮下注射。記錄大鼠糞便性狀及體重變化,以肉眼觀察或糞便隱血試紙檢測便血情況并進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)評分(disease activity index, DAI);ELISA法檢測結(jié)腸炎大鼠血漿及結(jié)腸勻漿中Hcy和結(jié)腸黏膜中sTM、PC、fPS水平;逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)檢測sTM和EPCRmRNA表達(dá)水平;免疫組化SP法檢測結(jié)腸組織中TM及EPCR表達(dá)
5、水平。
結(jié)果:
與正常對照組比較,TNBS結(jié)腸炎大鼠體重明顯減輕,出現(xiàn)不同程度的肉眼血便,DAI評分增高(P<0.05)。與正常對照組比較,TNBS模型組大鼠血漿和結(jié)腸組織Hcy水平明顯增高(P<0.01)。與正常對照+Hcy注射組比較,TNBS模型+Hcy注射組大鼠血漿及結(jié)腸組織Hcy水平顯著增加(P<0.01)。與正常對照組比較, TNBS結(jié)腸炎大鼠HI評分明顯增高(P<0.01),結(jié)腸MPO(P<0.01)水平
6、明顯增高。與正常對照組比較,TNBS模型組大鼠結(jié)腸黏膜sTM、PC水平明顯降低,fPS水平降低但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與TNBS模型組比較,TNBS模型+Hcy注射組大鼠結(jié)腸黏膜sTM、PC、fPS水平顯著下降(P<0.05)。免疫組化及RT-qPCR檢測顯示,與TNBS模型組比較,TNBS模型+Hcy注射組大鼠結(jié)腸黏膜中TM和EPCR表達(dá)顯著降低(P<0.05)。
結(jié)論:
Hcy可能通過降低實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜中P
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