羽藻和緣管滸苔提取物對(duì)酪氨酸酶活性抑制作用的研究.pdf

1、酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)是一種廣泛分布于微生物、動(dòng)植物以及人體當(dāng)中的與黑色素形成相關(guān)的酶。酪氨酸酶在生物體中具有單酚酶活性和二酚酶活性,單酚酶活性能將單酚加氧形成二酚,多酚酶活性能將二酚等多元酚氧化形成醌,這些醌類物質(zhì)多聚化,再與細(xì)胞內(nèi)蛋白相互作用最后形成黑色素。酪氨酸酶對(duì)于生物體黑色素的形成以及外來物入侵時(shí)獲得性免疫反應(yīng)的產(chǎn)生有至關(guān)重要的作用。從天然海藻中篩選具有高效抑制活性的酪氨酸酶抑制劑可以應(yīng)用于色素型皮膚病的治療,研

2、發(fā)美白化妝品、生物農(nóng)藥和食品添加劑等。
　　 本實(shí)驗(yàn)對(duì)11種海洋藻類進(jìn)行了酪氨酸酶抑制活性的篩選,研究了羽藻和緣管滸苔提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用。通過正交試驗(yàn)確定了這兩種海藻提取物的最佳提取條件,采用有機(jī)溶劑萃取分離出兩種海藻提取物的不同組分,通過動(dòng)力學(xué)學(xué)方法分析對(duì)酪氨酸酶的抑制作用類型和機(jī)理,相關(guān)研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　 1.對(duì)11種海洋藻類進(jìn)行了酪氨酸酶抑制活性的篩選。篩選體系總體積為5mL,底物多巴含量為1.0m

3、mol／L,磷酸緩沖液pH值為6.8,酪氨酸酶液的終濃度為1.28ug／mL,抑制物終濃度為4mg／mL,反應(yīng)溫度為37℃,測(cè)試反應(yīng)時(shí)間為1min。結(jié)果表明,在4mg／mL的提取物濃度條件下,紅藻門的叉枝藻、真江籬、蜈蚣藻、珊瑚藻、鴨毛藻和扇形擬伊藻對(duì)酪氨酸酶有不同程度的抑制作用,抑制活性均高于20％。其中叉枝藻和真江籬對(duì)酪氨酸酶的抑制率達(dá)40％以上,綠藻門的羽藻、孔石莼、緣管滸苔對(duì)酪氨酸酶表現(xiàn)出不同程度的抑制作用,其中羽藻的抑制率最高

4、,達(dá)78％,其次是緣管滸苔40.24％,紅藻門的細(xì)枝軟骨藻和褐藻門的角叉菜對(duì)酪氨酸酶則表現(xiàn)為反向激活作用,激活率分別為18.18％和20.45％。
　　 2.采用恒溫水浴浸提法對(duì)羽藻和緣管滸苔的化學(xué)成分進(jìn)行了提取,浸提溶劑為乙醇溶液、浸提料液比為1:12,浸提溫度為40℃。首先通過單因素實(shí)驗(yàn)確定單個(gè)浸提條件的最佳值,然后利用正交實(shí)驗(yàn)確定出最佳的浸提條件組合。羽藻的最佳浸提條件組合為:60℃恒溫水浴、60％的乙醇濃度、5h的浸提時(shí)

5、間和1:14的料液比；緣管滸苔的最佳浸提條件組合為:60℃恒溫水浴、60％的乙醇濃度、5h的浸提時(shí)間和1:10的料液比。
　　 3.將兩種海藻的乙醇浸提物經(jīng)有機(jī)溶劑萃取依次得到乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取物和水溶性組分,分別測(cè)定三種組分的抑制活性、抑制類型和多酚含量。結(jié)果表明:羽藻石油醚組分對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度IC50為2.1mg／mL,屬于非競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制,抑制常數(shù)為KI=0.33；羽藻乙酸乙酯組分對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度IC5

6、0為,0.27mg／mL,屬于非競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制,抑制常數(shù)為KI=0.13；羽藻水溶性組分對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度IC50為1.0mg／mL,屬于競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制,抑制常數(shù)為:KI=0.91。緣管滸苔石油醚萃取物對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度IC50為0.29mg／mL,屬于競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制,抑制常數(shù)為:KI=0.28；緣管滸苔乙酸乙酯組分對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度IC50為0.19mg／mL,屬于非競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制,抑制常數(shù)為KI=0.08；緣管滸苔水溶性