丹皮酚結(jié)構(gòu)類似物及其化學(xué)修飾物對(duì)酪氨酸酶抑制作用的研究.pdf

1、酪氨酸酶(EC1.14.18.1,Tyrosinase),亦稱多酚氧化酶,是一種廣泛存在于人體、動(dòng)植物以及微生物中的銅離子金屬酶,是生物體內(nèi)合成黑色素的關(guān)鍵酶。丹皮酚(Paeonol),又稱2-羥基-4-甲氧基苯乙酮,是牡丹皮的主要活性成分,具有非常廣泛的藥理活性。同時(shí)丹皮酚還能抑制酪氨酸酶的活力,減少皮膚黑色素的生成,使皮膚增白,但對(duì)它的抑制機(jī)理、它的類似物及其化學(xué)修飾物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用,鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。
　　本課題首先以丹皮

2、酚(a)作為先導(dǎo)物,通過(guò)酶動(dòng)力學(xué)和紫外光譜法研究丹皮酚及其結(jié)構(gòu)類似物(a)-(g)對(duì)酪氨酸酶的抑制作用,篩選出高效優(yōu)異抑制酪氨酸酶活性的母核結(jié)構(gòu),并總結(jié)出相關(guān)的構(gòu)效關(guān)系。酶動(dòng)力學(xué)研究表明化合物(a)-(g)對(duì)蘑菇酪氨酸酶有著明顯的抑制作用并且是可逆的,化合物(a)的抑制能力最強(qiáng),IC50=0.21 mM;鄰位羥基和對(duì)位甲氧基取代的類似物更利于抑制活性的增強(qiáng);化合物對(duì)酪氨酸酶的抑制類型取決于苯環(huán)上鄰位或?qū)ξ蝗〈姆N類?；衔?a)-(g

3、)與銅離子之間的螯合實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),羥基取代的類似物最大吸收波長(zhǎng)發(fā)生藍(lán)移,甲氧基取代的類似物不變。
　　在此基礎(chǔ)上,以丹皮酚及其結(jié)構(gòu)類似物 a-e為研究對(duì)象,成功地合成了10種丹皮酚縮氨基硫脲類化合物a1-e1和a2-e2。采用酶動(dòng)力學(xué)方法研究化合物a1-e1和 a2-e2抑制酪氨酸酶二酚酶活力,結(jié)果表明:丹皮縮氨基硫脲類似物比其母體化合物表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑制酪氨酸酶的活性,化合物d1對(duì)酪氨酸酶抑制能力最強(qiáng), IC50=0.006 mM,比

4、其母體化合物d約強(qiáng)208倍;苯基取代的化合物a1-e1比甲基取代的化合物 a2-e2具有更強(qiáng)的抑制活性;無(wú)論氫是被苯基或甲基取代,鄰對(duì)位取代的苯乙酮縮氨基硫脲類化合物的抑制能力為:二取代的苯乙酮縮氨基硫脲>單取代的苯乙酮縮氨基硫脲>未被取代的苯乙酮縮氨基硫脲。
　　運(yùn)用酶動(dòng)力學(xué)方法、紫外光譜法、熒光光譜法等手段研究化合物 d1對(duì)酪氨酸酶的抑制機(jī)理,并揭示特定結(jié)構(gòu)與活性之間的關(guān)系,結(jié)果表明:抑制動(dòng)力學(xué)研究表明化合物 d1作為酪氨酸酶