枸櫞酸坦度螺酮對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)觀察枸櫞酸坦度螺酮對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠（Spontaneously hypertensive rats，SHR）尾動(dòng)脈收縮壓的影響，探討枸櫞酸坦度螺酮對(duì)血管內(nèi)皮功能的修復(fù)作用；研究枸櫞酸坦度螺酮降壓的分子機(jī)制，進(jìn)一步觀察枸櫞酸坦度螺酮對(duì)于心、腦、腎等臟器是否有保護(hù)作用，為臨床治療提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　采用隨機(jī)數(shù)字表法將40只9周齡雄性SHR分為SHR模型組（10ml?kg-1?

2、d-1蒸餾水，n=8），左旋氨氯地平對(duì)照組（簡(jiǎn)稱左旋組，2.5mg?kg-1?d-1左旋氨氯地平，n=8），枸櫞酸坦度螺酮高劑量組（簡(jiǎn)稱高劑量組，40mg?kg-1?d-1，n=8），枸櫞酸坦度螺酮中劑量組（簡(jiǎn)稱中劑量組，20 mg?kg-1?d-1，n=8），枸櫞酸坦度螺酮低劑量組（簡(jiǎn)稱低劑量組，10mg?kg-1?d-1，n=8）。另設(shè)8只同周齡正常血壓WKY大鼠（Wistar-Kyoto rats）為正常組（簡(jiǎn)稱WKY組，10ml

3、?kg-1?d-1蒸餾水，n=8）。采用全自動(dòng)無創(chuàng)血壓測(cè)定系統(tǒng)BP-600A測(cè)量大鼠初次給藥前以及第一次給藥后30min、60min、90min、120min、180min、240min的尾動(dòng)脈收縮壓，并連續(xù)給藥至28d，分別測(cè)定連續(xù)給藥后7d、14d、21d、28d的血壓，每次測(cè)量時(shí)間為給藥后1h。連續(xù)治療28d后禁食、自由飲水24小時(shí)，腹主動(dòng)脈取血，分別收集血漿和血清，硝酸酶還原法測(cè)定血清一氧化氮（Nitric oxid，NO），酶

4、聯(lián)免疫分析（ELISA）法檢測(cè)血漿內(nèi)皮素(Endothelin，ET)、腎素(Renin)、血管緊張素Ⅱ（Angiotensin II，AngⅡ），去甲腎上腺素（Noradrenaline，NE）的水平。取左腎，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction，rt-qPCR）方法檢測(cè)ACE、AT-1R基因的表達(dá)情況；另取右腎用10％福爾馬林固定，蘇木素-伊紅（

5、Hematoxylin-Eosin，HE）染色檢測(cè)病理變化。取出心臟，用10%福爾馬林固定，用于HE染色檢測(cè)病理變化。大鼠斷頸開顱，快速取出腦組織，每組大鼠隨機(jī)選4只分離大腦藍(lán)斑等，rt-qPCR檢測(cè)藍(lán)斑α1、α2、β1、β2基因表達(dá)；另外4只取出整個(gè)腦組織，10%福爾馬林固定，用于 HE染色檢測(cè)病理變化。數(shù)據(jù)分析釆用SPSS22.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，組間兩兩比較方差齊時(shí)采用LSD法，結(jié)果以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”(x?SD）表示，P?0

6、.05被認(rèn)為有顯著差異。
　　結(jié)果：
　?。?）給藥前，與WKY正常組相比，各SHR組收縮壓（SBP）明顯升高（P<0.01）；單次給藥30min后，與模型組相比，枸櫞酸坦度螺酮高、中、低劑量組SBP具有不同程度的下降，且均有顯著差異（P<0.05或P<0.01），且高劑量組SBP下降更為顯著（P<0.01），并且降壓效果持續(xù)到給藥后240min（P<0.05或P<0.01）；左旋組給藥后血壓持續(xù)下降，并可以穩(wěn)壓到240mi

7、n（P<0.01或P<0.05）。與左旋組相比，高劑量組的降壓作用與其相當(dāng)（P>0.05），中低劑量組降壓效果相對(duì)較弱。連續(xù)多次給藥7d、14d后，與模型組相比，枸櫞酸坦度螺酮高、中劑量組 SBP均有顯著降低（P<0.01或 P<0.05）；連續(xù)給藥到28d，低劑量組降壓不明顯，而高、中劑量組仍有顯著降壓效果（P<0.01）。與左旋組相比，高劑量組的降壓效果相當(dāng)（P>0.05），但中、低劑量組降壓較果較弱。
　?。?）SHR模型組

8、大鼠血清NO含量顯著低于WKY組（P?0.01）；左旋組，高劑量組大鼠血清NO含量較SHR模型組明顯升高（P?0.01）；中、低劑量組NO含量的升高與模型組相比無顯著性差異（P>0.05）。
　　（3）SHR模型組大鼠血漿ET含量較WKY組明顯升高（P?0.05）；與SHR模型組相比，左旋組，高劑量組大鼠血漿ET含量均顯著降低（P?0.05）；中、低劑量組也有所降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）與WKY組相比，SHR模型

9、組大鼠血漿Renin含量顯著升高（P?0.01）；左旋組、高、中、低劑量組血清Renin含量相對(duì)于模型組明顯降低（P?0.01或P?0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）SHR模型組大鼠血漿NE含量與WKY組相比明顯升高（P<0.05），與SHR模型組相比，左旋組、高、中、低劑量組NE含量均明顯降低（P<0.01或P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）SHR模型組大鼠血漿AngⅡ含量顯著高于WKY組（P?0.0

10、5），左旋組、高劑量組大鼠血漿AngⅡ含量均較SHR模型組顯著降低（P?0.05）；中、低劑量組其含量也低于模型組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　（7）與WKY組相比，SHR模型組腎組織ACE、AT1R mRNA表達(dá)明顯升高，坦度螺酮高中低劑量組ACE、AT1R mRNA表達(dá)較模型組均有所降低，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　（8）與WKY組相比，SHR模型組大腦藍(lán)斑ɑ1-AR，β1-AR基因表達(dá)明顯升高，坦度螺酮高、中、低劑量組兩

11、基因表達(dá)較模型組有所降低，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與WKY組相比，SHR模型組ɑ2-AR基因表達(dá)較低，各劑量組用藥后，基因表達(dá)有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各組β2-AR基因表達(dá)無明顯趨勢(shì)。
　?。?）心、腦、腎HE染色顯示坦度螺酮各劑量組均有不同程度的心腦腎保護(hù)，其中以高劑量對(duì)心、腎的保護(hù)最為明顯。
　　結(jié)論：
　　1.枸櫞酸坦度螺酮對(duì)SHR尾動(dòng)脈收縮壓表現(xiàn)出較好的降壓效果，高劑量治療28d達(dá)到穩(wěn)定期，與左旋氨氯地平組