DNA凝聚態(tài)的研究——從結(jié)構(gòu)到功能.pdf

1、在過(guò)去的十幾年中，各種各樣的脂質(zhì)體和聚合物與DNA相互作用后用于基因轉(zhuǎn)染，已經(jīng)成為了很熱門的研究科目。盡管我們了解的還少，在DNA傳遞過(guò)程中我們遇到了特殊的物理和化學(xué)的障礙。作為基因轉(zhuǎn)染的一個(gè)重要的前提，DNA凝聚態(tài)受到越來(lái)越廣泛的關(guān)注。DNA凝聚態(tài)特別是DNA與轉(zhuǎn)染試劑相互作用的狀態(tài)對(duì)于轉(zhuǎn)染的效率具有很大的影響。
　　 經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)臒嶙冃院?，質(zhì)粒DNA的活性會(huì)有所增強(qiáng)。瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)熱變性后的質(zhì)粒DNA會(huì)有三種拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)組

2、份共存：共價(jià)閉合DNA；開環(huán)DNA和熱變性DNA。DNA凝聚態(tài)實(shí)驗(yàn)表明熱變性質(zhì)粒DNA比其它兩種組份的DNA對(duì)亞精胺和PEI的敏感度更強(qiáng)。用PEI做載體的基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)證明了熱變性質(zhì)粒DNA比未熱變性的基因轉(zhuǎn)染效率要高。對(duì)熱變性DNA的研究不僅展示了一種有效增加質(zhì)粒生物活性的方法，而且還提供了一條通過(guò)物理手段提高DNA生物活性的一種簡(jiǎn)便方法。
　　 設(shè)計(jì)了一種特殊的新型陽(yáng)離子聚合物poly（PEGMA）-4N，探討其與DNA相互作

3、用及其誘導(dǎo)DNA凝聚態(tài)的相關(guān)機(jī)制。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)到poly（PEGMA）-4N誘導(dǎo)DNA發(fā)生凝聚態(tài)；原子力顯微鏡（AFM）觀測(cè)到poly（PEGMA）-4N導(dǎo)致的DNA凝聚體的微觀結(jié)構(gòu)形態(tài)。我們推測(cè)：聚合物和DNA的相互作用主要是由于纏繞作用和靜電吸引作用。poly（PEGMA）-4N上的正電荷通過(guò)靜電吸引作用和DNA發(fā)生相互作用。由于poly（PEGMA）-4N是一個(gè)柔性的聚合物，所以它可以通過(guò)纏繞作用和DNA發(fā)生相互作用。對(duì)比這

4、兩個(gè)作用在DNA凝聚過(guò)程的貢獻(xiàn)，我們認(rèn)為在poly（PEGMA）-4N所誘導(dǎo)的DNA凝聚態(tài)中，纏繞作用比靜電作用發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。
　　 模擬酶（人造鋅指蛋白）的研究具有重要的科學(xué)意義，其相應(yīng)的應(yīng)用前景也十分地廣闊，是未來(lái)人類基因治療的重要性工具之一，我們利用超分子化學(xué)相關(guān)方法合成了仿鋅脂蛋白。通過(guò)核磁，圓二色光譜，質(zhì)譜等手段表征了它的結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步用瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)研究了模擬化合物與質(zhì)粒DNA的相互作用，證明了化學(xué)模擬的鋅