中國(guó)南海柳珊瑚形態(tài)學(xué)研究和18SrDNA基因分子系統(tǒng)學(xué)研究.pdf

1、柳珊瑚(Gorgonian)是指屬于腔腸動(dòng)物門(Coelenterata)、珊瑚蟲綱(Anthozoa)、八放珊瑚亞綱(Octocorallia)、軟珊瑚目(Alcyonacea)的硬軸珊瑚亞目(Scleraxonia)、全軸珊瑚亞目(Holaxonia)和鈣軸珊瑚亞目(Calcaxonia)中珊瑚的珊瑚統(tǒng)稱。柳珊瑚是重要的海洋藥用動(dòng)物。本研究對(duì)我國(guó)海南三亞灣和湛江徐聞柳珊瑚的資源情況各做了一次補(bǔ)充調(diào)查，利用柳珊瑚外部形態(tài)特征如群體外部

2、特征(顏色、分枝、珊瑚萼的大小和分布情況)和骨針特征(骨針形狀、大小和顏色)進(jìn)行了分類鑒定研究，發(fā)現(xiàn)許多新記錄種；通過2種樣品前處理方式和4種不同的DNA提取方法相結(jié)合，提取柳珊瑚Echinogoriaaurantiaca(Valenciennes)基因組DNA，并對(duì)其18SrRNA基因進(jìn)行了克隆和序列分析，比較研究了哪一種方法更容易提取DNA；同時(shí)對(duì)4種中國(guó)柳珊瑚的18SrDNA基因進(jìn)行了測(cè)序，結(jié)合從Genbank中搜索到的另外24條

3、柳珊瑚序列構(gòu)建柳珊瑚系統(tǒng)發(fā)育樹，進(jìn)行了柳珊瑚分子系統(tǒng)學(xué)研究。主要內(nèi)容與結(jié)果如下： 1.三亞灣雙帆石(間于東島和西島之間)柳珊瑚資源情況調(diào)查。共得到柳珊瑚12種，分別屬于5科8屬。同時(shí)，根據(jù)柳珊瑚形態(tài)結(jié)構(gòu)特征，研究了三亞灣柳珊瑚系統(tǒng)分類關(guān)系。其中BebryceindicaThomoson，1905為新記錄。 2.湛江徐聞柳珊瑚資源情況調(diào)查。這是第一次系統(tǒng)報(bào)道徐聞柳珊瑚的資源，共得到柳珊瑚16種，分別屬于7科14屬。根據(jù)柳珊

4、瑚群體顏色及骨針的形態(tài)學(xué)特征系統(tǒng)闡述了徐聞燈樓角柳珊瑚的系統(tǒng)分類關(guān)系。本次研究結(jié)合國(guó)際上最新的柳珊瑚分類系統(tǒng)，對(duì)國(guó)內(nèi)原有的形態(tài)分類作了修正，這更將促進(jìn)中國(guó)柳珊瑚資源情況為國(guó)際上認(rèn)同和了解。叢柳珊瑚Paraplexaurasp.、Dichotellasp1，Dichotellasp2為新記錄屬，鞭柳珊瑚EllisellamaculataStuder,1878，為新記錄。 3.幾種不同柳珊瑚DNA提取方法的比較研究。由于柳珊瑚DNA

5、非常容易降解，難以提取，本研究通過2種樣品前處理方式和4種不同的DNA提取方法相結(jié)合，提取柳珊瑚Echinogoriaaurantiaca(Valenciennes)基因組DNA，并對(duì)其18SrRNA基因進(jìn)行了克隆和序列分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)于2種樣品前處理方式，采用純酒精進(jìn)行樣品前處理比PBS(磷酸緩沖液)進(jìn)行樣品前處理效果要好。在4種不同的DNA提取方法中，以CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)法提取基因組DNA效果最好，其余三種方法如

6、PVP(聚乙烯基吡咯烷酮)法，高鹽法和酚/氯仿法的提取效果較差。并且不同樣品的鈣質(zhì)沉淀對(duì)DNA都有一定程度的吸附。另外，本研究通過PCR擴(kuò)增、克隆測(cè)序得到柳珊瑚18SrRNA基因序列，并將其序列與Leptogorgiachilensis的18SrRNA基因序列在DNA序列上和RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)上對(duì)比分析。結(jié)果表明，柳珊瑚18SrRNA基因序列非常保守，其變異率為1.21％。RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)也非常保守，兩者大部分莖環(huán)結(jié)構(gòu)表現(xiàn)相同，少數(shù)結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出

7、差異性。RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)于柳珊瑚的分子系統(tǒng)發(fā)育分析可能有一定的參考價(jià)值。 4.柳珊瑚18SrDNA基因的分子系統(tǒng)學(xué)研究。本研究在國(guó)內(nèi)第一次報(bào)道了柳珊瑚18SrDNA基因的分子系統(tǒng)學(xué)研究。通過對(duì)4種柳珊瑚的18SrDNA基因的測(cè)序，結(jié)合Genbank中搜索到的24條其他柳珊瑚的18SrDNA序列，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明柳珊瑚可分為兩個(gè)進(jìn)化枝，系統(tǒng)樹清楚表明了進(jìn)化枝一的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，但未能很好反映進(jìn)化枝二的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。進(jìn)化枝一的