銅綠假單胞菌青霉素結(jié)合蛋白-1b與藻酸鹽產(chǎn)生關(guān)系的探討.pdf

1、【目的】利用RNA干擾技術(shù)(RNA interference,RNAi)抑制銅綠假單胞菌PBP-1b編碼基因mrcB的表達(dá),探討PBP-1b對(duì)藻酸鹽編碼基因algD產(chǎn)生的影響,以期為臨床生物被膜耐藥提供新的思路。
　　【方法】采用siRNA表達(dá)載體的方法,分別設(shè)計(jì)2對(duì)靶向mrcB基因shRNA序列,構(gòu)建pMF54mrcBshRNA干擾載體;將構(gòu)建好的干擾載體及空載分別電轉(zhuǎn)入銅綠假單胞菌中,RT-PCR篩選抑制效率高的干擾載體,并分

2、別計(jì)算第24小時(shí)、第三天、第六天的抑制率;同時(shí)用RT-PCR的方法分別檢測PAO1標(biāo)準(zhǔn)株及轉(zhuǎn)化株中藻酸鹽編碼基因algD分別在這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)內(nèi)的的表達(dá)情況,通過統(tǒng)計(jì)學(xué)處理觀察algD的表達(dá)量有無差異。
　　【結(jié)果】經(jīng)DNA測序鑒定,成功構(gòu)建pMF54mrcBshRNA1/pMF54mrcBshRNA2干擾載體;將pMF54mrcBshRNA1/pMF54mrcBshRNA2/pMF54電轉(zhuǎn)入銅綠假單胞菌中,分別與空白組對(duì)照,RT-P

3、CR檢測第24小時(shí)mrcB表達(dá)量pMF54mrcBshRNA2有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。計(jì)算其第24小時(shí)、第三天及第六天的抑制率分別為26％、41%、9%。單因素方差分析示標(biāo)準(zhǔn)株的algD基因在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,第三天最高;轉(zhuǎn)化株的表達(dá)量,在這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)都比較高,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)用T-檢驗(yàn)分別比較標(biāo)準(zhǔn)株及轉(zhuǎn)化株algD基因的表達(dá)量,第三天無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05。
　　【結(jié)論】PAO1標(biāo)準(zhǔn)株藻酸鹽編碼基因al