無細胞系統(tǒng)原位制備蛋白質(zhì)芯片及新型離子液體修飾電極的制備.pdf

1、蛋白質(zhì)微陣列具有高通量、微型化、集成化等特點，因而常用于蛋白質(zhì)組學研究中對于生物化學和分子生物學的多元化和平行化檢驗。傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)微陣列需要通過基因克隆、表達、純化、點樣等步驟，程序繁瑣、費時費力、成本較高，已成為蛋白質(zhì)芯片技術(shù)發(fā)展的瓶頸。為解決這些難題，我們設(shè)計了一種新方法，先將PCR擴增的基因固定在基底芯片上，再利用無細胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)將其轉(zhuǎn)變成蛋白質(zhì)微陣列。這種生物素標記的DNA和生物素標記的抗GST抗體可以與預(yù)先固定在醛基玻片上

2、的鏈親和素結(jié)合而固定在芯片上。以無細胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)孵育后，原位無細胞合成的GST標簽蛋白被抗GST標簽抗體捕獲而固定在芯片上。然后對蛋白質(zhì)進行進一步純化，并用探針檢測，同時對蛋白質(zhì)活性進行了研究并進行初步定量分析，初步估算12個基因表達的蛋白質(zhì)產(chǎn)量在0.35～4.0fmol/點之間?？疾炝死美野沸盘柗糯蠹夹g(shù)（TSA）檢測的效果。本文以鼠IgG為研究對象，對TSA技術(shù)進行了考察，與傳統(tǒng)熒光檢測相比，TSA技術(shù)對鼠IgG的檢測限提高約1

3、00倍。
　　 室溫離子液體（RTILs）具有特殊的理化性質(zhì)，在電分析化學領(lǐng)域它既可以作為溶劑和支持電解質(zhì)，又可以作為粘合劑和固定材料用于制備修飾電極。本文利用兩種不同性質(zhì)的離子液體制備了修飾電極，研究內(nèi)容如下：
　　 1以1-乙基3.甲基咪唑四氟硼酸鹽（EMIMBF4）為粘合劑制備離子液體碳糊電極（CILE），并以此為基底電極在亞甲基藍單體溶液中電化學聚合制備了聚亞甲基藍膜修飾電極，研究了聚亞甲基藍膜修飾電極的形貌并對

4、其進行了表征。同時研究了其對酚類化合物3，4-二羥基苯甲酸的電催化行為，其催化的峰電流與3，4-二羥基苯甲酸的濃度在5.0×10-4～3.0×10-2mol/L呈線性關(guān)系，檢測限為1.72×10-4mol/L（3σ）。
　　 2將室溫離子液體1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽（BMIMPF6）和Nation混合后形成一種新型的復(fù)合膜材料，利用該膜材料將Mb固定于傳統(tǒng)碳糊電極（CPE）上，詳細考察了Mb在Nafion-BMIMPF6