糖芯片的制備及其與蛋白質(zhì)的相互作用研究.pdf

1、蛋白質(zhì)與糖的相互作用是許多重要的生物過程的基礎(chǔ)，如細(xì)胞粘附、細(xì)胞遷移和信號傳導(dǎo)等，這些生物過程負(fù)責(zé)調(diào)控細(xì)胞和生物機(jī)體的生理功能。不僅如此，這些作用還與疾病的發(fā)生密切相關(guān)，如腫瘤細(xì)胞表面會(huì)發(fā)生異常的糖基化反應(yīng)，細(xì)胞黏附是寄生蟲、真菌、細(xì)菌以及病毒入侵宿主細(xì)胞的前提。因此，深入了解蛋白質(zhì)與糖的相互作用的機(jī)制以及尋找能夠抑制它們之間的相互作用的化合物(如抗體和小分子配體)對了解生命過程和治療疾病至關(guān)重要。糖芯片在糖組學(xué)研究、藥物開發(fā)和臨床診斷

2、等方面有著重要的應(yīng)用前景，因此備受關(guān)注。為此，本論文選定糖芯片為研究對象，系統(tǒng)地研究了糖芯片的制備及其在蛋白質(zhì)與糖的相互作用研究中的應(yīng)用。主要工作包括： 1.概述了糖芯片的研究進(jìn)展； 2.概述了蛋白質(zhì)與糖相互作用的研究進(jìn)展； 3.建立了一種新的非共價(jià)類型的糖芯片的制備方法，并研究了其在蛋白質(zhì)與糖的相互作用中的應(yīng)用。合成了三苯甲基糖衍生物，以96孔聚苯乙烯微孔板為固相載體，將合成的三苯甲基糖衍生物作為探針通過非共價(jià)

3、作用(疏水作用為主)固定到96孔板表面，采用熒光標(biāo)記的凝集素與探針雜交，研究制備的糖芯片在蛋白質(zhì)與糖的相互作用研究中的應(yīng)用，并且優(yōu)化了凝集素與糖芯片的雜交條件。結(jié)果表明，三苯甲基糖衍生物能夠穩(wěn)定地結(jié)合在微孔板表面而不被洗脫，凝集素能夠識別被固定的糖類化合物，證明制備的糖芯片能用于蛋白質(zhì)對糖的識別作用的研究；通過研究小分子糖化合物的抑制作用，表明糖芯片可以用于蛋白質(zhì)與糖的相互作用的抑制劑的篩選。 　　4.建立了一種新的共價(jià)類型的糖芯片的

4、制備方法，并研究了其在蛋白質(zhì)與糖的相互作用中的應(yīng)用。以96孔聚苯乙烯微孔板為固相載體，在其表面鋪上一層凝膠，將凝膠活化，優(yōu)化固相化學(xué)反應(yīng)條件，通過共價(jià)鍵將未經(jīng)過化學(xué)修飾的單糖和二糖固定到96孔板表面，加入熒光標(biāo)記的凝集素進(jìn)行雜交，研究此類的糖芯片在蛋白質(zhì)與糖的相互作用研究中的應(yīng)用。結(jié)果表明，凝集素能夠識別被固定的單糖和二糖，證明制備的糖芯片能用于蛋白質(zhì)對糖的識別作用的研究；通過研究小分子糖化合物的抑制作用，表明糖芯片可以用于蛋白質(zhì)與糖的