不同溫度下安定對(duì)大頭金蠅生長(zhǎng)發(fā)育的影響及其在死后間隔時(shí)間推斷方面的應(yīng)用.pdf

1、目的：了解不同溫度下安定對(duì)大頭金蠅生長(zhǎng)發(fā)育的影響，積累石家莊地區(qū)尸食性蠅類(lèi)在具毒尸體上的發(fā)育生物學(xué)資料，為刑事調(diào)查推斷死后間隔時(shí)間(postmorteminterval，PMI)提供科學(xué)依據(jù)。 方法：從自然界誘捕大頭金蠅成蠅，帶回實(shí)驗(yàn)室，在生化培養(yǎng)箱內(nèi)連續(xù)飼養(yǎng)至第三代，以第三代成蠅作為母代，開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。將喂飼大頭金蠅幼蟲(chóng)的5只家兔分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組家兔經(jīng)耳緣靜脈注射生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組家兔經(jīng)耳緣靜脈按照5mg/kg、10mg/

2、kg、15mg/kg、20mg/kg的劑量依次注射安定。30分鐘后處死，5只家兔的處死方法均為重?fù)粽聿垦杆僦滤?。取家兔的肌肉分別保存，對(duì)照組家兔標(biāo)定為Mo，其余4只家兔按給藥濃度由小到大依次標(biāo)定為M1、M2、M3和M4。設(shè)定生化培養(yǎng)箱的溫度依次為16℃、20℃、24℃、28℃和32℃，保持濕度和光周期不變。用豬肉誘大頭金蠅產(chǎn)卵，產(chǎn)卵時(shí)間記為零時(shí)，將卵塊移至家兔的肌肉上飼養(yǎng)。幼蟲(chóng)孵出12小時(shí)后，每隔12小時(shí)留取一次標(biāo)本，每組每次留取10頭

3、幼蟲(chóng)，直至幼蟲(chóng)到達(dá)離食期。將幼蟲(chóng)用80℃熱水燙死，然后放入濃度為70％的酒精中保存。從保存液中取出幼蟲(chóng)標(biāo)本，置入表面皿。用大頭針在幼蟲(chóng)腹部?jī)蓚?cè)扎數(shù)個(gè)孔，放入10％KOH溶液中。消化24小時(shí)后，用鑷子擠壓排擠出其內(nèi)部已消化的組織。用凈水洗去堿液，先在不同濃度的酒精中逐級(jí)脫水，再用100％酒精與二甲苯的混合液(比例為1：1)浸泡半小時(shí)，最后放入二甲苯中透明。在載玻片上滴加加拿大樹(shù)膠，解剖鏡下整姿，使兩葉頭咽骨重疊，用蓋玻片封片，置于陰涼處風(fēng)

4、干。用光學(xué)顯微鏡觀察幼蟲(chóng)的特征結(jié)構(gòu)一頭咽骨、前后氣門(mén)和體表棘刺，并用數(shù)碼顯微照像機(jī)拍照；用千分尺測(cè)量每組幼蟲(chóng)的體長(zhǎng)；用電子天平稱(chēng)量每組幼蟲(chóng)的體重；鏡下測(cè)量幼蟲(chóng)頭咽骨的長(zhǎng)度。幼蟲(chóng)到達(dá)離食期后每隔12小時(shí)留取蛹標(biāo)本，每組每次留取10頭，測(cè)量各組蛹標(biāo)本的體重。將各組各次測(cè)得的幼蟲(chóng)及蛹標(biāo)本的一系列指標(biāo)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示。蛹羽化為成蠅后，每天記錄各組成蠅羽化的只數(shù)。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中記錄下各組卵的孵化時(shí)間、幼蟲(chóng)化蛹時(shí)間、成蠅羽化時(shí)間。比

5、較不同溫度下在注射不同劑量安定的家兔肌肉上取食的大頭金蠅幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)速率及幼蟲(chóng)到達(dá)離食期后蛹重之間是否有差別。各組間比較應(yīng)用方差分析(ANOVA)，數(shù)據(jù)結(jié)果由SPSS13.0軟件處理得出。比較各組卵孵化時(shí)間、幼蟲(chóng)化蛹時(shí)間、成蠅羽化時(shí)間是否有差別。研究不同溫度下家兔肌肉中的安定是否會(huì)對(duì)大頭金蠅幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生影響。 結(jié)果：觀察研究結(jié)果表明，在相同溫度下，各組卵的孵出時(shí)間沒(méi)有差別，但不同溫度下各組卵的孵出間不同。16℃、20℃、24

6、℃、28℃和32℃各組卵的孵出時(shí)間分別為20小時(shí)、16小時(shí)、14小時(shí)、12小時(shí)和8小時(shí)。在孵出后的不同時(shí)間內(nèi)，隨藥物濃度的增加各組幼蟲(chóng)的各項(xiàng)指標(biāo)出現(xiàn)顯著差別。但各組幼蟲(chóng)的體重、體長(zhǎng)和蛹重的差別不具有顯著性。各組蛹的蛹期長(zhǎng)短無(wú)差別。 16℃時(shí)，5組幼蟲(chóng)的體重于孵出后96小時(shí)均出現(xiàn)顯著差著性，體長(zhǎng)于孵出后72小時(shí)差別均具有顯著性，其中M4組最大，M0組最小。各組幼蟲(chóng)達(dá)到最大體長(zhǎng)和體重值的時(shí)間不同，M4組最先達(dá)到，Mo組與M1組最后達(dá)

7、到。各組幼蟲(chóng)到達(dá)化蛹時(shí)間不同，M4組組最先到達(dá)，Mo組最后到達(dá)。 20℃時(shí)，5組幼蟲(chóng)的體重、體長(zhǎng)于孵出后72小時(shí)差別均具有顯著性，其中M4組最大，M0組最小。各組幼蟲(chóng)達(dá)到最大體長(zhǎng)和體重值的時(shí)間不同，M4組與M3組最先達(dá)到，Mo組最后達(dá)到。各組幼蟲(chóng)到達(dá)化蛹時(shí)間不同，M4組和M3組最先到達(dá)，M0組最后到達(dá)。 24℃時(shí)，5組幼蟲(chóng)的體重、體長(zhǎng)于孵出后60小時(shí)均出現(xiàn)顯著差別，其中M4組最大，M0組最小。各組幼蟲(chóng)達(dá)到最大體長(zhǎng)和體重值

8、的時(shí)間不同，M4組、M3組和M2組最先達(dá)到，M0組最后達(dá)到。各組幼蟲(chóng)到達(dá)化蛹時(shí)間不同，M4組和M3組最先到達(dá)，M0組最后到達(dá)。 28℃時(shí)，5組幼蟲(chóng)的體重于孵出后36小時(shí)差別均具有顯著性，5組幼蟲(chóng)的體長(zhǎng)于孵出后48小時(shí)差別均具有顯著性，其中M4組最大，M0組最小。各組幼蟲(chóng)達(dá)到最大體長(zhǎng)和體重值的時(shí)間不同，M3組最先達(dá)到，M0組最后達(dá)到。各組幼蟲(chóng)到達(dá)化蛹時(shí)間不同，M4組最先到達(dá)，M0組和M1組最后到達(dá)。 32℃時(shí)，5組幼蟲(chóng)的體

9、重、體長(zhǎng)于孵出后36小時(shí)均出現(xiàn)顯著差別，其中M4組最大，M1組最小。各組幼蟲(chóng)達(dá)到最大體長(zhǎng)和體重值的時(shí)間不同，M4組最先達(dá)到，Mo組與M1組最后達(dá)到。各組幼蟲(chóng)到達(dá)化蛹時(shí)間不同，M4組最先到達(dá)，Mo組和M1組最后到達(dá)。 28℃條件下各組幼蟲(chóng)的頭咽骨長(zhǎng)度在24～36小時(shí)之間變化最快。在不同藥物濃度下，各組幼蟲(chóng)的頭咽骨長(zhǎng)度差別不具有顯著性。但各組幼蟲(chóng)達(dá)到最大長(zhǎng)度的時(shí)間略有差別，M4組最先達(dá)到，M0組最后達(dá)到，頭咽骨最大長(zhǎng)度值之間的差別具

10、有顯著性。在同一時(shí)間內(nèi)，藥物濃度越高，頭咽骨的幾丁質(zhì)化程度越深，前后氣門(mén)和體表棘刺的幾丁質(zhì)化程度越強(qiáng)。 在相同藥物濃度下，隨溫度不同，各組幼蟲(chóng)的孵出時(shí)間有差別，溫度高的組別孵出所需時(shí)間低于溫度低的組別。同一時(shí)間相比，溫度越高，幼蟲(chóng)體長(zhǎng)、體重值越大，頭咽骨長(zhǎng)度也隨之增加。幼蟲(chóng)前后氣門(mén)、體表棘刺幾丁質(zhì)化的程度隨溫度升高增強(qiáng)加快，發(fā)育至對(duì)應(yīng)疊齡期所需的時(shí)間越短。但各組幼蟲(chóng)的體重、體長(zhǎng)、蛹重差別不具有顯著性。 安定對(duì)大頭金蠅的羽