C-端序列分析方法學研究與HWAP-I生物活性方面的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、蛋白質序列分析是蛋白質研究中的核心技術.N端測序已經成為十分完善的技術,并已經實現了自動化.C端與N端一樣,在蛋白質分子結構分析中具有重要地位,不僅對N端封閉的蛋白質進行序列測定,而且對基因克隆具有指導意義.盡管Schlack-Kumpf降解法的研究進展緩慢,但是近十年研究表明該方法是很有希望成為C端順序測定的常規(guī)方法.在蛋白質C端(異)硫氰酸法順序測定技術中,標準氨基酸乙內酰硫脲(TH-AA)的制備是必須首先要解決的問題.該文以L-型

2、氨基酸為原料,采用乙酸酐做活化試劑,TBS-ITC為偶聯試劑,制備了20種TH-AA,反應產物通過RP-HPLC進行了分離純化.該文同時在偶聯試劑方面進行了探索,采用合成的13肽(NH2-KKESDFLMFVYLV-COOH)為模型肽,并偶聯到DITC玻璃珠上進行了方法學研究.通過實驗條件的優(yōu)化對C-端序列分析的化學方法進行了微量化探索,在0.5nmol規(guī)??色@得三個氨基酸C-端序列信號.改變偶聯試劑的濃度發(fā)現在0.2mol/L可獲得最

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