生物活性物質(zhì)的分離分析新方法研究.pdf

1、生物活性物質(zhì)的分離分析在現(xiàn)代分析科學(xué)中已顯出越來越重要的作用，并廣泛用于食品安全、環(huán)境監(jiān)測、臨床檢驗(yàn)、藥物分析、醫(yī)藥衛(wèi)生和質(zhì)量控制等諸多領(lǐng)域。在這些領(lǐng)域中通常需要對復(fù)雜體系中的一種或多種組分進(jìn)行分離分析，如中藥分析中的某些有效成分的濃度測定、臨床診斷中對疾病相關(guān)標(biāo)志物的檢測、食品分析中對牛奶中三聚氰胺的檢出等。這就使得簡便、快速、靈敏、低成本的分離分析方法顯得尤為重要。本研究就建立生物活性物質(zhì)的分離分析方法開展了以下幾方面的工作：

2、 1.高效液相色譜-程序波長設(shè)計(jì)紫外檢測法用于同時(shí)測定血漿色氨酸和犬尿氨酸及其應(yīng)用研究。 本研究通過高效液相色譜-程序波長設(shè)置紫外檢測建立了血漿色氨酸和犬尿氨酸的同時(shí)測定方法，該方法具有簡單，快速，靈敏，特異等優(yōu)點(diǎn)。在Agilent Hypersil ODS（125 mm×4.0 mm，5μm）柱上6分鐘內(nèi)即可完成血漿色氨酸和犬尿氨酸兩種組分的同時(shí)分離測定。流出液通過紫外檢測器程序波長設(shè)計(jì)檢測，0到4分鐘波長設(shè)置為360 nm

3、以檢測犬尿氨酸，4到6分鐘波長設(shè)置為278 nm以檢測色氨酸，這樣可實(shí)現(xiàn)這兩種組分在一次流動(dòng)過程中的同時(shí)檢測。該方法測定犬尿氨酸的線性范圍是0.269到21.20μmol/L，色氨酸的線性范圍是3.35到678.0μmol/L。犬尿氨酸和色氨酸的檢出限分別是0.028μmol/L和0.053μmol/L。精密度和回收率都符合臨床檢驗(yàn)要求。該方法被用于分析川崎病、過敏性紫癜、腎病綜合征、急性腎炎兒童患者的血漿色氨酸和犬尿氨酸濃度。結(jié)果顯示

4、川崎病組各指標(biāo)和對照組間有顯著性差異，其它組疾病與對照組無顯著性差異。 2.功能化超順磁性磁珠用于腫瘤標(biāo)志物檢測。 利用超順磁性磁珠，結(jié)合以絲網(wǎng)印刷電極（SPCE）為工作電極的電化學(xué)檢測技術(shù)，提出一種新型的利用磁場固定生物組分的免疫傳感器，用于腫瘤標(biāo)志物CA199的分離檢測。該傳感器是通過在環(huán)氧基末端修飾的超順磁性納米磁珠表面結(jié)合上鏈酶親和素，利用鏈酶親和素和生物素反應(yīng)，將生物素標(biāo)記的抗體連接在磁珠表面，再加入經(jīng)離線溫育

5、的樣品和辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體（HRP-anti-CA199），這樣酶標(biāo)抗體被成功連接在超順磁性磁珠表面，通過磁場將其固定在SPCE表面，加入鄰苯二胺-過氧化氫體系進(jìn)行電化學(xué)檢測。電化學(xué)響應(yīng)信號(hào)與CA199抗原濃度成正比，線性范圍為5.0～120 U/mL。該方法無需固定化試劑，具有簡單、靈敏、低成本等特點(diǎn)。 3.微流控芯片電化學(xué)檢測在免疫分析中的應(yīng)用。 隨著分析化學(xué)、生物學(xué)、電子學(xué)、計(jì)算機(jī)技術(shù)和微加工技術(shù)的迅速發(fā)展，

6、新的分析儀器和方法不斷被應(yīng)用于檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，使檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)也相應(yīng)地得到了快速發(fā)展。檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)已逐步提出向即時(shí)檢驗(yàn)（point-of-caretesting，POCT）、家庭檢測或野外檢測方向發(fā)展，以實(shí)現(xiàn)標(biāo)本的快速方便的檢測。近年來發(fā)展起來的微流控免疫分析在儀器的微型化和便攜化方面具有較好的應(yīng)用前景，使實(shí)現(xiàn)POCT的目標(biāo)成為可能。微流控免疫分析是通過微加工技術(shù)在芯片材料上構(gòu)建出微米級(jí)的通道用于免疫分析。微流控免疫分析因其獨(dú)特的性質(zhì)，能大大改善常規(guī)免

7、疫分析性能：（1）由于微通道結(jié)構(gòu)較大的比表面積，能使免疫反應(yīng)大大縮短，提高分析效率。微流控芯片分析多在幾秒或幾十秒時(shí)間內(nèi)就能完成組分的分離檢測。（2）由于通道的尺寸小，能大大節(jié)約貴重的免疫試劑消耗量，降低檢測成本。微流控分析的進(jìn)樣量已降低至納升級(jí)甚至更低的水平。（3）易于實(shí)現(xiàn)儀器便攜化，微型化和操作自動(dòng)化，有望用于POCT。本研究通過微流控通道中的免疫反應(yīng)，將印刷電極整合在芯片上實(shí)現(xiàn)微流控芯片免疫分析電化學(xué)檢測一體化裝置用于腫瘤標(biāo)志物含