款冬花活性成分及轉錄組研究.pdf

1、款冬花為止咳化痰的常用中藥。目前對款冬的研究較少，其止咳化痰活性成分與作用靶點均不明確，轉錄組研究也未見報道。傳統(tǒng)用藥經驗認為款冬花蕾在采收期藥效最好，開花后藥效下降且不能入藥。中藥藥效與其化學成分種類及含量密切相關，因此，可以通過不同發(fā)育時間藥材化學成分和藥效差異的比較推出其藥效物質基礎。
　　目的:通過對不同發(fā)育時期（采收期花蕾、次年大地解凍后開花前花蕾、開花期款冬花）進行化學成分與藥效學研究分析找到款冬的止咳化痰活性物質，并

2、找到活性物質的作用靶點。同時，采用DGE技術從中找到被注釋到的與款冬中化學成分生物合成相關的差異表達基因，以期從轉錄水平上闡釋不發(fā)育時期款冬中有效成分的積累規(guī)律，為款冬活性成分的研究提供理論依據(jù)。
　　方法:本文利用核磁代謝組學技術結合止咳化痰動物模型對三個不同發(fā)育時期的款冬進行化學成分分析及藥效學評價，找到款冬止咳化痰的有效活性物質。采用網絡藥理學對款冬止咳化痰的有效成分、作用靶點進行預測分析，并通過轉錄組研究在基因水平上對不同

3、發(fā)育時期款冬有效物質的積累情況進行驗證。
　　結果:(1)利用核磁代謝組學技術對三個不同發(fā)育時期的款冬花水提物、水提物不同萃取部位進行整體化學成分研究，并利用氨水止咳和酚紅祛痰實驗對其進行藥效學比較，通過分析與藥效變化一致的化學成分來找出款冬止咳化痰的有效成分為乙酸、脯氨酸、谷氨酸、富馬酸、咖啡酸、綠原酸，蘆丁、山奈酚、3，5-O-二咖啡?？鼘幩帷?，2-二甲基-6-乙酰基苯并二氫吡喃酮、3，4-O-二咖啡?？鼘幩?、EMDNT、款

4、冬酮、β-谷甾醇、谷甾酮、4，5-O-二咖啡?？鼘幩?、Bauer-7-ene-3β，16α-diol。由單邊量分析結果可以看出三個不同時期的款冬對3-羥基丁酸、亮氨酸、膽堿、甘油、谷氨酸、β-葡萄糖、異亮氨酸、甘油磷脂酰膽堿、乳酸、纈氨酸的調節(jié)作用與藥效一致（上升或下降），說明這10個化合物可能為款冬止咳化痰的藥效標志物。MetPA結果顯示款冬主要對纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸的生物合成，半乳糖代謝，甘油磷脂代謝等多條代謝途徑產生調節(jié)作用。

5、
　　(2)結果顯示，在細胞過程中發(fā)揮重要作用的Eosinophil cationic protein、Interleukin-2、Thyroid hormone receptor alpha、Trafficking protein particle complex subunit3、Mitogen-activated protein kinase14、Histamine N-methyltransferase、Macrophag

6、e metalloelastase、Glutathione S-transferase Mu1、Histo-blood group ABO system transferase、Tyrosine-protein kinase ABL1以及Prostaglandin G/H synthase2是款冬主要活性成分潛在靶點蛋白群。COX-2、TRAPPC3、MAPK14、HNMT、MMP12、ABO、GSTM1、RNASE3、IL2和THRA

7、等是其潛在靶點基因群。
　　(3)在苯丙素與黃酮類的生物合成途徑中與咖啡?？崴嵯嚓P的酶羥基肉桂酰輔酶A(CQT)和香豆酸-3-羥基化酶(C3H)、芥子酸相關的5-羥基阿魏酸-O-甲基轉移酶(COMT)以及槲皮素和山奈酚相關的黃酮類合成酶(FLS)得到注釋。根據(jù)這些酶相關基因在三個不同發(fā)育時期的款冬中的表達結果，可以看出芥子酸的含量在開花時達到最高，而咖啡?？崴?、槲皮素和山奈酚的含量在采收期最高，開花期最低。轉錄組結果與化學結果