款冬花化學(xué)成分分離分析和質(zhì)量控制指標(biāo)研究.pdf

1、款冬花為菊科款冬屬植物——款冬（Tussilago farfara L.）的干燥花蕾，是一種常用中藥，具有潤肺下氣，化痰止咳的功效，在歷版《中國藥典》中均有記載?？疃ㄊ侵貞c的一種道地藥材，具有良好的應(yīng)用前景。國內(nèi)外關(guān)于款冬花的基礎(chǔ)研究主要集中于款冬酮、蘆丁、槲皮素等幾種常見的有效成分，現(xiàn)行的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)也只對(duì)款冬酮進(jìn)行含量限定，質(zhì)控指標(biāo)單一，缺乏針對(duì)有效的質(zhì)量控制指標(biāo)和相應(yīng)的質(zhì)控方法，款冬花藥材質(zhì)量、用藥的有效性和安全性難以保證。

2、r>　　針對(duì)上述問題，本論文在總結(jié)近年來關(guān)于天然植物分離分析和質(zhì)量控制的文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，將提取分離、純化和分析檢測技術(shù)有機(jī)結(jié)合，根據(jù)款冬花中不同類型化學(xué)成分的性質(zhì)和特點(diǎn)，提出了多指標(biāo)、多參數(shù)質(zhì)控體系，重點(diǎn)針對(duì)款冬花的標(biāo)示成分（款冬酮）、有效成分（黃酮類、有機(jī)酸類等）、毒性成分（生物堿）和可綜合利用成分（多糖）這四個(gè)方面，開展了多種化學(xué)成分的高效分析方法和技術(shù)的研究，最終提出了款冬花藥材質(zhì)量控制指標(biāo)的新方案建議。
　　本文的主要研究工作

3、及結(jié)果如下：
　　①對(duì)款冬花的化學(xué)成分、分離分析方法、藥理活性等進(jìn)行了系統(tǒng)的文獻(xiàn)綜述，結(jié)合近年來天然植物分離分析和質(zhì)量控制的相關(guān)研究，提出了款冬花質(zhì)量控制指標(biāo)研究的總體方案。
　　②根據(jù)款冬花中有效成分、毒性成分、可綜合利用成分的性質(zhì)和特點(diǎn)，采用溶劑提取法對(duì)款冬花中有效成分進(jìn)行了提取，應(yīng)用柱層析、制備薄層色譜等技術(shù)對(duì)款冬花甲醇提取物的石油醚和乙酸乙酯萃取浸膏進(jìn)行系統(tǒng)分離，分離并鑒定了8種化合物。采用酸水提取法制備了款冬花總生

4、物堿，通過酸性染料比色法測定了款冬花酸提物和總生物堿中的生物堿含量。采用水提醇沉法制備了款冬花多糖，然后經(jīng)分級(jí)醇沉獲得三種醇沉多糖即40％多糖（TPS-1）、60%多糖（TPS-2）、80%多糖（TPS-3），為款冬花有效成分、毒性成分、可綜合利用成分的的分析提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。
　?、蹜?yīng)用HPLC技術(shù)分析了款冬酮所處的萃取部位，研究了HSCCC溶劑體系的篩選方法，提出了高效分離的三元兩相溶劑體系，建立了款冬酮快速分離制備的技術(shù)路線，

5、同時(shí)制備了14-acetoxy-7β-(3'-ethyl cis-crotonoyloxy)-lα-(2'-methylbutyryloxy)-notonipetranone，為標(biāo)示成分的高效制備和質(zhì)量控制研究奠定了基礎(chǔ)。
　　④采用膠束毛細(xì)管電泳模式對(duì)款冬花甲醇提取物中的款冬酮進(jìn)行了檢測，測得藥材中款冬酮含量為1.66 mg·g-1；重點(diǎn)開展了黃酮類、有機(jī)酸類等多種有效成分的HPCE同時(shí)測定研究，優(yōu)化了影響電泳分離的主要參數(shù)，獲

6、得了款冬花甲醇提取物的最優(yōu)分離條件，實(shí)現(xiàn)了款冬花中多種成分的在線同時(shí)檢測，識(shí)別了2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎⑻J丁、異阿魏酸、金絲桃苷、阿魏酸、綠原酸、異綠原酸、槲皮素、沒食子酸、咖啡酸等10種有效成分，并測定了除沒食子酸外其他9種有效成分的含量。
　　⑤針對(duì)款冬花中毒性生物堿含量低、難以檢測的問題，首先應(yīng)用吡咯顯色法開展了總生物堿中的RET-PAs的衍生化研究，實(shí)現(xiàn)了總生物堿中RET-PAs的定量測定；然后采用場放大

7、進(jìn)樣-膠束掃集兩步富集技術(shù)，優(yōu)化了影響分離和富集效果的因素，建立了基于HPCE技術(shù)的款冬花PAs高效快速分析方法，實(shí)現(xiàn)了款冬花總生物堿中克氏千里光堿和千里光寧堿的高效定量檢測。與常規(guī)MEKC相比，該富集方法靈敏度有了較大的提高，富集倍數(shù)為12倍和15倍，檢測限達(dá)2.8μg·L-1和4.2μg·L-1。并通過UV和MS技術(shù)鑒定了總生物堿中其他兩種主要化合物，咖啡酸甲酯和阿魏酸甲酯。該方法還被應(yīng)用到款冬花酸性提取物的PAs檢測中，實(shí)現(xiàn)了克氏

8、千里光堿的有效檢測。
　　⑥針對(duì)款冬花多糖的綜合利用需要，應(yīng)用苯酚硫酸法和間羥基聯(lián)苯比色法考察了款冬花多糖（TPS）及三種醇沉多糖（TPS-1、TPS-2、TPS-3）的中性糖和酸性糖含量，通過紅外對(duì)其構(gòu)型進(jìn)行了初步分析。結(jié)合多糖的多羥基結(jié)構(gòu)，建立了PMP-CZE快速分析款冬花多糖中7種單糖的分析方法，優(yōu)化了影響電泳分離的主要參數(shù)，確定了最優(yōu)分析條件，實(shí)現(xiàn)了對(duì)款冬花多糖和三種醇沉多糖的單糖組成的快速分離和定量分析，為款冬花多糖組分

9、的質(zhì)量控制提供了有效的方法。采用DPPH法和CAA法分別從分子和細(xì)胞水平評(píng)價(jià)了粗多糖和三種醇沉多糖的抗氧化活性。測定結(jié)果顯示款冬花多糖和三種醇沉多糖均具有抗氧化活性，其中 TPS-2具有最強(qiáng)的抗氧化能力。結(jié)合酸性多糖的分子量、抗氧化活性及單糖組成信息，發(fā)現(xiàn)多糖的抗氧化活性與分子量、單糖組成有關(guān)。
　?、呋谏鲜鲅芯浚瑥臉?biāo)示成分、有效成分、毒性成分三個(gè)方面，初步設(shè)計(jì)了款冬花藥材中質(zhì)量控制指標(biāo)的分析檢測提高方案。新方案將影響用藥有效性