梨火疫病菌群體感應(yīng)系統(tǒng)的初步研究.pdf

1、由Erwinia amylovora引起的火疫病是一類毀滅性的細(xì)菌病害，常造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)危害。為了有效防治病害的發(fā)生及危害，人們對(duì)其致病因子的分子機(jī)理作了大量的研究。而許多植物病原細(xì)菌毒性因子的產(chǎn)生都依賴于群體感應(yīng)(quorum sensing，QS)調(diào)節(jié)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。 LuxS蛋白參與細(xì)菌群體感應(yīng)(QS)信號(hào)分子autoinducer-2(AI-2)合成的最后一步。本研究首次鑒定了Er.amylovora中的luxS同源

2、基因。通過(guò)Vibrio harveyi發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)到Er.amylovora菌株0056能夠合成AI-2，AI-2的最大功能活性出現(xiàn)在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期。0056分別用AB、LB和NB培養(yǎng)液培養(yǎng)，結(jié)果顯示在NB中產(chǎn)生AI-2的量最大。Er.amylovora的luxS同源基因在luxS缺陷的菌株Escherichia coli DH5a中表達(dá)，發(fā)現(xiàn)DH5a可恢復(fù)產(chǎn)生AI-2的能力；并通過(guò)構(gòu)建Er.amylovora的luxS突變體進(jìn)一步證

3、明Er.amylovora中的luxS同源基因在合成AI-2分子中起決定性作用，但其突變體對(duì)梨幼果的致病能力并未降低，然而其生長(zhǎng)能力與野生菌株相比有所下降，突變體與野生菌株共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)突變體幾乎不能夠生長(zhǎng)。我們初步推斷AI-2分子可能影響到Er.amylovora對(duì)環(huán)境的適合度。 SdiA屬于與群體效應(yīng)相關(guān)的luxR家族基因，目前已證實(shí)存在于Es.coli和Salmonella typhimurium基因組中。本研究從梨火

4、疫病菌中克隆到了一個(gè)sdiA的同源基因，該基因與Es.coli和S.typhimurium的sdiA基因在氨基酸水平上分別有45.42％和43.33％6＃同源性，69.58％和67.08％的相似性。Southern雜交顯示其基因在梨火疫基因組中有兩個(gè)拷貝。此外，本研究根據(jù)梨火疫病菌和其它細(xì)菌的luxR同源基因序列比對(duì)結(jié)果設(shè)計(jì)了一對(duì)特異引物F-EA和R-EA，該引物能夠特異地區(qū)分梨火疫和其它細(xì)菌，并能夠成功地檢測(cè)到10cfu的菌體，在含有