自由基降解海帶硫酸多糖的研究.pdf

1、海帶經(jīng)酶解，除去褐藻酸，得到海帶硫酸多糖粗品。粗品經(jīng)DEAE-23，DEAE-41離子交換纖維素分離純化，可以得到三種純化的硫酸多糖LAS-17 LAS-2、LAS-3，經(jīng)純度檢驗無雜質(zhì)。以LAS-3為代表，理化性質(zhì)檢測表明其糖含量為36.90％，硫酸基含量為11.91％，分子量在2690KD左右。由于多糖分子量的分布與其生物活性的高低有直接聯(lián)系，當(dāng)分子量較大時，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，理化性質(zhì)研究及其生物學(xué)功能均受到一定的限制。因此尋找合適的降解多

2、糖的新技術(shù)，變得越來越重要。降解多糖有很多方法，經(jīng)典的酸解法、酶解法對海帶硫酸多糖都有一定的弊端。近來研究表明，酶法、氧化降解法、超聲波法及γ-射線法的降解過程中，自由基都發(fā)揮著重要的作用。因此我們設(shè)計實驗驗證自由基降解的可行性。 在自由基的降解過程中，我們采用兩種體系：Harber—Weiss反應(yīng)體系和Fenton反應(yīng)體系。在H體系中，不是H<，2>0<，2>的氧化作用降解多糖，因為僅加入H<，2>O<，2>降解程度很低。當(dāng)

3、在降解體系中，加入有機(jī)酸和V<，c>后，多糖的降解發(fā)生了很大的變化，顏色變淺，粘度降低，多糖的分子量也降低，在瓊脂糖凝膠電泳圖譜上表現(xiàn)為較集中的譜帶。我們述研究了H體系多糖的降解程度受環(huán)境溫度和底物濃度的影響。改變反應(yīng)溫度，在15－40℃的范圍內(nèi)，降解程度與溫度呈正比；改變反應(yīng)濃度V<，c>和H<，2>0<，2>濃度從1-20mmol／L變化范圍內(nèi)，降解程度和濃度成正比：但如果濃度再增大，降解程度變化不大。F體系按照H體系得到的最適濃度

4、進(jìn)行降解，效果顯著。 海帶硫酸多糖降解之后，通過脫鹽，濃縮，凍干得純品。用超濾和高效液相色譜測定其分子量，同時檢測理化性質(zhì)。利用H體系和F體系降解的海帶硫酸多糖，分子量分別為10，000Da和8，000Da。硫酸酚法測定多糖含量，降解后多糖糖含量略有上升，可能是由于進(jìn)一步純化的原因；比濁法測定硫酸基含量，降解后多糖硫酸基含量略有下降，降解過程硫酸根損失不大。氣相色譜法和紙層析法測定單糖組成，降解前后沒有發(fā)生變化，均含有巖藻糖、甘

5、露糖、半乳糖、木糖和糖醛酸。利用紅外光譜檢測，海帶硫酸多糖是一系列主鏈由a(1→2)連接的硫酸多糖，半乳糖為支鏈和主鏈相連接的核心，降解前后結(jié)構(gòu)沒有明顯變化。 利用海帶硫酸多糖促小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖實驗驗證降解前后多糖的生物學(xué)功能，檢測結(jié)果表明：同對照相比，海帶硫酸多糖能明顯促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，本身具有有絲分裂原樣作用。LAS對Con A協(xié)同作用實驗表明：LAS不具有協(xié)同有絲分裂原Con A的作用。LAS對地塞米松引起免疫抑制

6、的拮抗實驗表明：LAS-2和LAS-3組分對地塞米松引起的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖抑制均具有顯著的拮抗作用。降解前后多糖免疫促進(jìn)作用對比實驗表明：降解前后多糖都能明顯促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，但降解多糖與未降解多糖對比未見有顯著性差異。降解前后多糖促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的連續(xù)性實驗表明：作用時間較短的情況下，降解多糖促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞增殖的作用比未降解多糖明顯，隨著作用時間的延長，未降解多糖的優(yōu)勢顯示出來。由此可以推測，以前動物實驗中的作用延遲現(xiàn)象