含羽扇豆酮藥材資源的評價及羽扇豆酮改善2型糖尿病大鼠胰島素抵抗作用、機(jī)制研究.pdf

1、目的:本文通過檢測雞血藤、葛根、千里光等藥材中羽扇豆酮的量，并分離、鑒定及測定芭蕉、香蕉、野蕉的花和苞片中羽扇豆酮的含量，為尋找或擴(kuò)大羽扇豆酮原藥材資源提供參考;對芭蕉根提取物中羽扇豆酮的進(jìn)行純度檢測，為羽扇豆酮的研究開發(fā)和利用提供依據(jù);并驗(yàn)證和評價羽扇豆酮改善2型糖尿病胰島素抵抗的效果，及進(jìn)一步研究其作用機(jī)制，為羽扇豆酮開發(fā)為抗糖尿病的一類新藥提供重要的科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用超高效液相色譜法(UPLC)對雞血

2、藤、葛根、千里光等藥材進(jìn)行檢測、分析，評價藥材中羽扇豆酮的量;利用硅膠柱色譜、質(zhì)譜(MS)及核磁共振技術(shù)(NMR)對香蕉、芭蕉、野蕉的花和苞片進(jìn)行羽扇豆酮分離及結(jié)構(gòu)鑒別，并以高效液相色譜法(HPLC)測定其含量。
　　2.建立芭蕉根提取物中羽扇豆酮HPLC的含量測定方法，評價不同批次提取物中羽扇豆酮的含量，分析羽扇豆酮在提取物中的純度。
　　3.建立2型糖尿病大鼠胰島素抵抗模型，灌胃給予羽扇豆酮，驗(yàn)證羽扇豆酮對大鼠的體重、血

3、糖、血清FFA、LEP、HbA1C及脂代謝的影響，評價羽扇豆酮改善2型糖尿病大鼠胰島素抵抗的藥效作用的穩(wěn)定性，并采用酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa)檢測血清中ADPN及PAS染色法測定肝糖原的量，較為全面評價羽扇豆酮改善2型糖尿病胰島素抵抗的效果。
　　4.利用Western Blot法測定給藥羽扇豆酮后大鼠骨骼肌中的GLUT4、InsR、IRS-1及IRS-2和脂肪組織中GLUT4、InsR、IRS-1、IRS-2及PPAR-γ蛋白

4、表達(dá)的情況，并用Elisa法測定血清中SOD、MDA、GSH-Px含量及對大腸腸系膜組織進(jìn)行病理切片的觀察研究。
　　結(jié)果:
　　1.在UPLC-DAD條件下，檢測雞血藤、葛根、千里光等藥材中的羽扇豆酮有干擾，而在UPLC-ELSD條件下檢測羽扇豆酮沒有干擾，但其含量均低于檢測限;香蕉、芭蕉、野蕉的花和苞片中存在羽扇豆酮，但三個品種羽扇豆酮含量差異較大，同植株老花和嫩花及老苞片和嫩苞片的含量均以老的部位高，同植株花和苞片的含

5、量均以苞片的高。
　　2.建立的HPLC含量測定方法，具有快速，簡便，重現(xiàn)性好，回收率高等特點(diǎn)，且三批芭蕉根提取物中羽扇豆酮的含量均大于97％，尤其新分離的芭蕉根提取物中羽扇豆酮的含量大于98％。
　　3.連續(xù)給藥30天后，正常組（給予基礎(chǔ)飼料）大鼠的體重呈升高趨勢，羽扇豆酮的高、中、低劑量組及陽性藥物組大鼠的體重變化不大，模型組大鼠的體重有明顯的下降;與模型組比較，給藥后的第二周、第三周、第四周，不同劑量的羽扇豆酮均具有降

6、血糖作用，能降血清中FFA、HbA1c、 LEP的含量，能使肝糖原合成及ADNP含量增加，并降低TC、TG、LDL-C、TC/HDL-C比值等脂代謝指標(biāo)，但對HDL-C具有一定的升高作用。
　　4.羽扇豆酮能降低MDA及升高GSH-Px的含量，能使大鼠骨骼肌中的GLUT4、InsR、IRS-1、IRS-2及PPAR-γ和脂肪組織中GLUT4、InsR、IRS-1、IRS-2及PPAR-γ蛋白的表達(dá)增加，并能使大腸腸系膜組織的淋巴細(xì)

7、胞排列緊密且細(xì)胞個數(shù)增加，但對SOD的影響不大。
　　結(jié)論:
　　1.所收集到的雞血藤、葛根、千里光等藥材含羽扇豆酮的量較低，不能作為羽扇豆酮原材料的來源，而香蕉、野蕉、芭蕉的花和苞片可作為羽扇豆酮原材料，但要注意品種、部位中羽扇豆酮含量的差異。
　　2.建立的HPLC法可用于芭蕉根提取物的質(zhì)量控制，羽扇豆酮的純度能夠符合中藥新藥研究的材料要求，但羽扇豆酮的穩(wěn)定性可能會受環(huán)境等因素的影響，應(yīng)注意保存。
　　3.羽